[发明专利]鸡新城疫,传染性支气管炎二联疫苗的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种二联疫苗的生产方法，具体地说，是鸡新城疫，传染性支气管炎二联疫苗的生产工艺，属于生物工程领域。

背景技术

新城疫病毒(Newcastledisease virus，NDV)又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)、副黏病毒属(Paramyxovirus)中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。弱毒株仅引起鸡群呼吸道感染和产蛋量下降，但可迅速康复。人类可因接触病禽和活毒疫苗而引起结膜炎或淋巴腺炎，但很快便康复。新城疫病毒被OIE规定为A类疫病，是一种急性、高度接触性传染病，发病率和死亡率都在90％以上，1935年梁英、马闻天等首次证实我国有该病的流行[1]，现在本病被我国列为I类疫病。

新城疫病毒是ssRNA病毒，有包膜。病毒颗粒具多形性，有圆形、椭圆形和长杆状等。成熟的病毒粒子直径100～400nm。包膜为双层结构膜，由宿主细胞外膜的脂类与病毒糖蛋白结合衍生而来。包膜表面有长12～15nm的刺突，具有血凝素、神经氨酸酶和溶血素。病毒的中心是ssRNA分子与附在其上的蛋白质衣壳粒，缠绕成螺旋对称的核衣壳，直径约18nm。成熟的病毒是以出芽方式释放至细胞外。

新城疫病毒对外界环境的抵抗力较强，55℃作用45min和直射阳光下作用30min才被灭活。病毒在4℃中存放几周，在-20℃中存放几个月或在-70℃中存放几年，其感染力均不受影响。在新城疫暴发后8周之内，仍可在鸡舍、蛋巢、蛋壳和羽毛中分离到病毒。病毒对乙醚敏感。大多数去污剂能将它迅速灭活。氢氧化钠等碱性物质对它的消毒效果不稳定。3％～5％来苏尔、酚和甲酚5min内可将裸露的病毒粒子灭活。在37℃的孵卵器内，用0.1％福尔马林熏蒸6h便可把它灭活。

新城疫病毒的所有毒株都能凝集多种禽类和哺乳类动物的红细胞。大多数毒株能凝集公牛和绵羊的红细胞。在病毒的血凝试验中，鸡的红细胞最为常用。该病毒可在9～12日龄的鸡胚绒毛尿囊膜上和尿囊腔中培养，大多数毒株也可在兔、猪、犊牛和猴的肾细胞以及鸡组织细胞等继代或传代细胞中培养。鸡胚的成纤维细胞、鸡胚和仓鼠的肾细胞常用于新城疫病毒的培养。

目前，虽然疫苗的使用使该病得到了有效控制，但由于疫苗免疫效果不理想，以及流行毒株的毒力增强和我国养鸡业水平的参差不齐，使得该病仍然是严重危害我国养禽业的疾病之一，在我国经常有非典型新城疫的发生，甚至典型新城疫的爆发。

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bornchistis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bornchistis Virus，IBV)引起的一种急性、高度接触性、病毒性传染病。该病主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统等.其感染的主要特征是气管锣音、咳嗽、打喷嚏和肾脏肿大。此外，该病还可以引起蛋鸡产蛋量下降和蛋品质下降，但死亡率通常较低，雏鸡可由于呼吸道或肾脏的感染而死亡。

鸡传染性支气管炎病毒是尼多目(Nidovirales)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Conovirus)第三群禽冠状病毒的代表株，其毒粒呈中等多型性的球形或椭圆型，直径约80～120nm，是有囊膜的、不分节段的、单股正链RNA病毒。

IBV对外界环境的抵抗力不强，多数毒株56℃15min及45℃90min即被灭活，而适应于鸡胚的毒株可在此温度存活3h以上。IBV耐酸不耐碱，在pH6.0～6.5条件下培养较在pH7.0～8.0条件下稳定，在细胞培养时以pH6.0～6.5较好。IBV对乙醚、氯仿及其它脂溶剂敏感，但20％的脂溶剂只能降低病毒的滴度而不能使其完全灭活。

IBV应避免在-20℃保存，但感染性尿囊液-30℃保存多年仍然存活，冻干尿囊液可保存30年，IBV本身没有血凝作用，但经1％胰蛋白酶、卵磷酷C、魏氏梭菌液及乙醚等处理后，常可凝集鸡、家兔、仓鼠、鹅及小鼠等多种动物及人的红细胞。