[发明专利]利用透明颤菌血红蛋白基因表达的重组钝齿棒杆菌及其应用

权利要求书

1.一株透明颤菌血红蛋白基因表达的重组钝齿棒杆菌，其分类命名为钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA/pJC1-tac-vgb，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 208132。

2.用权利要求1所述重组钝齿棒杆菌发酵生产L-精氨酸的方法，其特征是：

出发菌株为重组钝齿棒杆菌SYPA/pJC1-tac-vgb；

培养基组成：摇瓶种子培养基以g/L计：葡萄糖30，玉米浆20，(NH₄)₂SO₄20，KH₂PO₄1，MgSO₄·7H₂O 0.5，尿素1.5；pH 7.0～7.2，121℃灭菌20min，装液量20mL/250mL；

摇瓶发酵培养基以g/L计：葡萄糖150，玉米浆4，(NH₄)₂SO₄20，KH₂PO₄1.5，MgSO₄·7H₂O 0.5，FeSO₄·7H₂O 0.02，MnSO₄·H₂O 0.02，生物素8×10^-5，L-组氨酸5×10^-4，CaCO₃30；pH 7.0～7.2，121℃灭菌10min，20mL/250mL三角瓶；

罐上发酵培养基以g/L计：葡萄糖150，玉米浆4，(NH₄)₂SO₄20，KH₂PO₄1.5，MgSO₄·7H₂O 0.5，FeSO₄·7H₂O 0.02，MnSO₄·H₂O 0.02，生物素8×10^-5，L-组氨酸5×10^-4，氨水控制pH 7.0～7.2，121℃灭菌10min，装液量3L/5L发酵罐；

培养条件：种子培养：于固体培养基平板中挑取钝齿棒杆菌单菌落接种于种子培养基中，150r/min，30℃培养15h；

摇瓶发酵培养：种子培养后，按5％接种量转接到发酵培养基中置往复式摇床，110r/min，30℃培养96h；

5L发酵罐培养：装液量3L，接种量5％～10％，31℃，转速600r/min，通气量3L/min，用氨水连续流加控制pH为7.0～7.2，培养96h。