[发明专利]一种多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明属于噬菌体展示多肽库技术，涉及一种采用噬菌体多肽库筛选的与SR-A胞浆域相互作用的小分子多肽，以及该多肽的应用。

背景技术

动脉粥样硬化性心脑血管疾病是严重危害人类健康的疾病之一。因此，世界各国对动脉粥样硬化的研究、预防及治疗均十分重视。近年来，脂质负荷的泡沫细胞被认为是“治疗的靶点”。抑制脂质在细胞中的积聚、减轻炎症反应已成为当今关注的两个焦点。

SR-A(A类清道夫受体)主要在巨噬细胞表面表达，可以无反馈抑制地摄取氧化修饰的LDL(低密度脂蛋白)，导致脂质在细胞内的积聚，从而形成泡沫细胞，最终导致AS(动脉粥样硬化)斑块形成；因此，在抗AS的药物研发中，SR-A可以作为不同于现有药物的新作用靶点。其中，对SR-A的配基结合区的研究及寻求氧化LDL的拮抗剂是当前研究的热点。然而，SR-A的配基种类繁多，比如：可以识别某些细菌细胞壁的成分，参与宿主免疫调节；可以清除凋亡细胞等。另外，还有许多配体的功能意义还不清楚。从受体胞外的配基结合位点阻断SR-A对修饰LDL的摄取，则有可能阻断SR-A与其他配基的结合，从而影响受体发挥重要生理功能。而近年来许多研究表明，SR-A的胞浆结构域介导受体的内移及表达，与脂质积聚的关系更为直接。因此，如果以SR-A胞浆域作为干预靶点，将可能干预SR-A介导的脂质在细胞中的积聚，从而干预泡沫细胞的形成。同时，不影响SR-A与其他的配基结合，发挥其生理功能。

干预SR-A胞浆域调节受体介导脂质内吞功能的方法之一就是采用能胞浆域结合而阻断受体发挥作用的小分子多肽或化合物。噬菌体展示多肽库技术自问世以来在蛋白质相互作用位点分析、药物设计和疫苗开发、筛选蛋白质所需的配基等方面显示出广阔的应用前景。其筛选的共同点是钓取与蛋白质(如抗体、受体、酶)特异性结合的配基。淘选方法主要以噬菌体表面展示多肽与靶物质的结合为基础，由Smith等建立的亲和选择方法和理论一直延用至今。通过筛选噬菌体多肽库，得到的多肽具有广泛的作用。比如：根据筛选所得多肽的一级结构，可以通过计算机进行序列分析，发现与筛选靶点相互作用的天然蛋白质；人工合成筛选所得的多肽，可以作为筛选靶点的抑制剂，抑制其与其他蛋白之间在体内外的相互作用，从而更好地研究靶蛋白的功能等。本研究通过筛选噬菌体多肽库，寻找与SR-A胞浆域相互作用的小分子多肽，研究多肽分子对SR-A介导的脂质内吞等功能的影响。

发明内容

本发明的目的是提供一种能与SR-A胞浆域特异性结合的小分子多肽。

本发明的另一目的是上述多肽的应用。

本发明的目的是通过下列措施实现的：

一种多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3所示。

含有上述多肽的融合蛋白。

编码上述多肽的核苷酸序列。

含有上述核苷酸序列的表达载体。这些表达载体可以是质粒、噬菌体、细菌、宿主细胞等。

上述多肽在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。

本发明以CSR-A(SR-A胞浆域)与GST(谷胱甘肽转移酶)融合蛋白为靶点，筛选噬菌体随机多肽库，得到8个噬菌体克隆，与SR-A胞浆域特异性结合，而与GST无交叉反应。经DNA测序，得到三种多肽序列(H5、H9、H11)。将三种多肽以GST融合蛋白的形式表达，其中GST-H9和GST-H11可以与全长SR-A相结合。将多肽以GST融合蛋白的形式表达，可以与全长SR-A相结合。

人工合成多肽H11(TDRLFMNSIWPG，SEQ ID No.1)，在其氨基端融合一穿膜肽(TAT)，这种融合的多肽TAT-H11可以高速高效地进入细胞，并且该多肽进入细胞的量随着孵育浓度的增加而增加，而随着孵育时间的延长进入细胞内TAT-H11的量无显著改变。。H11与SR-A结合后，可以抑制诱导分化的THP-1细胞结合摄取AcLDL(乙酰化低密度脂蛋白)。这为干预脂质在细胞内积聚，从而干预泡沫细胞的形成奠定了基础。

本发明的有益效果：

本发明以SR-A的胞浆域为靶点，通过噬菌体随机多肽库，得到了与SR-A特异性结合的多肽H11、H9。人工合成多肽H11，研究发现该多肽可以抑制诱导分化的THP-1细胞结合摄取AcLDL，这为干预脂质在细胞内积聚，从而干预泡沫细胞的形成奠定了基础。故这些多肽及其核苷酸序列、融合蛋白等可用于制备抗动脉粥样硬化药物。

附图说明

图1. 1.5％琼脂糖凝胶电泳鉴定挑选克隆的PCR结果