[发明专利]一种沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌，属于生物技术领域，该菌菌体细胞和发酵液对昆虫幼虫有较强毒性，具有广阔的开发利用前景。

二、背景技术

生物农药是实现无公害农业的关键环节之一。昆虫病原线虫及其共生菌，作为有效控制害虫的生物杀虫剂，是最安全的生物杀虫剂之一。昆虫病原线虫共生菌杀虫谱广，对鳞翅目、鞘翅目昆虫均有毒杀活性，有很大的市场开发潜力。Duchaud等在2003年对昆虫病原线虫共生菌基因组全序列分析表明，昆虫病原线虫共生菌为已知基因组序列的细菌中含有杀虫毒素基因最多的一种细菌。目前已发现的昆虫病原线虫共生菌包括致病杆菌属(Xenorhabdus)、发光杆状菌属(Photorhabdus)和沙雷氏菌属(Serratia)，属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，分别与斯氏线虫(Steinernematidae)、异小杆线虫(Heterorhabditidae)(Kaya，H.K.& Gaugler，R.(1993).Entomopathogenic nematodes.Annual Review of Entomology.38，181-206.)和崇明拟异小杆线虫(Heterorhabditidoideschongmingensis)(Zhang，C.X.，Liu，J.R.，Xu，M.X.，Sun，J.，Yang，S.Y.，Gao，G.F.，Hearnn，M.S.，Lai，R.，He，Z.Y.，Wu，Y.D.& Zhang，K.Y.(2008)Heterorhabditidoideschongmingensis gen.nov.，sp.nov.(Rhabditida：Rhabditidae)，a novel member of theentomopathogenic nematodes.J Invertebr Pathol 98，153-168.)共生。在自然界，共生菌存在于3龄侵染期线虫的肠道中，不能从土壤中分离获得。昆虫病原线虫共生细菌随昆虫病原线虫进入昆虫体内后，可在血腔内释放、大量繁殖并分泌杀虫活性极高的蛋白毒素，在48h内杀死并分解昆虫，为线虫提供美餐。昆虫病原线虫寄主范围广泛，具主动搜索能力；对土栖性及钻蛀性害虫与隐蔽性害虫有特殊防效；昆虫对昆虫病原线虫及其共生菌无抗性、田间施用时可和许多化学农药混合使用，并能以传统喷药设备施用；对人畜、植物及有益生物安全，在欧美一些国家可以豁免注册生产和释放。

昆虫病原线虫拟异小杆线虫属(Heterorhabditidoides)是本实验室新进描述的昆虫病原线虫新属，DZ0503SBSH1-2是与其共生的沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌菌株。沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌新菌株的发掘，为开发新型杀虫毒素蛋白和杀虫基因提供了新的资源。

三、发明内容

技术问题  本发明的目的在于针对生产实践中的实际问题和需求，开发新型微生物杀虫资源。本发明利用细菌较保守的16S rRNA基因序列信息结合DNA-DNA杂交、脂肪酸含量、G+C含量、以及生理生化等指标分离到了一种沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌菌株，为开发新型杀虫毒素蛋白和杀虫基因提供了新的资源。

技术方案  下面为本发明的主要内容：

本发明提供一种沙雷氏菌属昆虫病原线虫共生菌，其菌株是一株革兰氏染色反应阴性菌DZ0503SBSH1-2，2008年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC M 208104，分类命名：Serratiasp.DZ0503SBSH1-2。经鉴定为沙雷氏菌属(Serratia sp.)。主要生物学特性：G-，菌体短杆状，大小在0.8～1.3×0.6～0.7微米，需氧的，单鞭毛，能运动，在营养琼脂上呈红色、圆形平滑与清晰的边缘，产生色素，不能产生孢子，精氨酸双水解酶阳性，有过氧化氢酶活性无氧化酶活性，无脲酶活性，不能还原硝酸盐，不产生吲哚、硫化氢、甲基红活性，V-P(Voges-Proskauer)试验阳性，能水解淀粉和吐温80、酪蛋白、明胶和吐温20，不能水解纤维素，不能利用DL-苏氨酸、DL-苯丙氨酸，可以利用D-乳糖、D-树胶醛糖、D-棉子糖、D-木糖、D-蜜二糖、乳酸盐、L-鸟氨酸、L-脯氨酸、L-羟脯氨酸、不能利用草酸盐、醋酸盐，对头孢他啶和万古霉素有抗性，主要脂肪酸为十六碳饱和脂肪酸(34.76％)、环式十七碳饱和脂肪酸(20.03％)和ω8c—环式十九碳饱和脂肪酸(17.24％)。