[发明专利]一种中药复杂体系中系列成分的快速筛选及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药及药物分析领域，具体涉及中药复杂体系的成分分析，本发明可应用于中药注射液等中药制剂的质量控制以及中药复杂体系中有效成分的确定。

背景技术

中药是传统中医临床应用的主要形式，在人类健康事业中发挥着重要作用。尽管许多中药已有几千年临床应用的历史，其临床疗效值得肯定，但迄今为止绝大多数中药的成分构成仍未得以阐明，已成为中药药效物质基础、质量控制及作用机理等中药现代化关键科学问题研究的主要制约瓶颈。中药这一复杂体系组份分析的难点在于其所含成分的多样性、成分间物化性质迥异、缺乏相应的对照品进行结构确证。尽管近年来各种分析技术手段得到了长足的发展，但中药复杂成分的全面检测、鉴定仍是一个艰巨的挑战。

近年来，质谱特别是各种色谱联用质谱技术以及质谱串联技术如单级四极杆质谱、离子阱质谱、飞行时间质谱或三重四极杆质谱与高效液相联用及最新出现的高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪等，已发展成为化学成分定性、定量分析的主流技术之一，并以其快速、灵敏、低成本的特性在中药复杂体系的研究中获得了广泛的应用。但总体来说，目前的研究方法还存在一些不足：(1)中药成分复杂，但多数研究并不能实现中药成分的全面鉴定，而只能对有标准对照品的化学成分进行选择性鉴定。(2)中药成分复杂，运用各种质谱联用技术进行中药复杂体系组分分析将产生海量的数据集，在为结构推断提供足够信息的同时，也对信息的处理技术提出了新的挑战。逐个鉴定化合物的方法费时费力，因此目前非常需要一种具有普遍适用性的、快速的中药复杂体系成分分析与结构鉴定方法。随着植物化学领域的快速发展，越来越多的结果表明中药的成分组成以系列化合物为主，大多数中药的成分组成类别及其母核结构已基本明确。如人参所含的主要有效成分为人参皂苷类成分，五味子中所含的主要有效成分为木脂素类成分。另外，具有相同的母核结构的系列化合物在碰撞诱导裂解模式中会产生相似的碎裂途径以及共有的与母核相关的诊断离子。基于中药复杂体系的这些特点，本发明建立了一种普适性的质谱信息处理方法诊断离子延伸策略，实现了对中药复杂体系中系列成分的快速筛选及鉴定。

发明内容

本发明公开了一种快速筛选及鉴定中药复杂体系中系列成分的分析方法。

中药复杂体系中系列成分的筛选及鉴定方法，包括以下步骤：

A、制备含有中药复杂体系中各系列成分的供试品溶液，

B、采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对供试品溶液进行正或负离子全扫描得到总离子流色谱图以及多级碎片信息，

C、运用诊断离子延伸策略进行中药复杂体系中系列成分的快速筛选及鉴定，

本发明中诊断离子延伸策略由如下几个步骤组成：

a、分别将标准品或系列成分的标准提取物注入高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪，获得母离子及碎片离子的精确质量数，综合每一系列化合物的碎片信息，将普遍存在的、丰度较大的碎片离子选定为该系列成分的诊断离子，并根据碎裂的情况总结出系列成分的碎裂规律；

b、将得到的每一系列成分的诊断离子分别输入数据处理工作站，从而对通过B步骤得到的中药复杂体系的总离子流色谱图中所检测到的峰进行分类；

c、基于分类后化合物的母离子与碎片离子的精确质量数之差及各系列成分的碎裂规律判断各化合物所含的基团；

d、结合分类的结果与化学基团的结果以及系列成分的碎裂规律对化合物的结构进行确证。

其中中药复杂体系优选单味中药或中药复方经炮制后的产物。

1、制备含有中药复杂体系中各系列成分的供试品溶液

制备时既要尽可能多地提取主要成分，又要尽量去除辅料等的干扰，根据中药复杂体系自身特性选择适宜的提取方法。提取方法通常包括过滤、液液萃取、固相萃取。液液萃取溶剂包括水饱和正丁醇、乙酸乙酯、乙醚、氯仿、苯、正己烷单一或按一定的比例混合使用，固相萃取则可以根据实际情况选择不同填料的固相小柱。

2、采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对供试品溶液进行正或负离子全扫描得到总离子流色谱图以及多级碎片信息

根据所研究中药复杂体系的特性优化色谱(包括色谱柱的长度、内径、填料，柱温，流速，流动相组成，洗脱梯度)、质谱条件(仪器的各设定参数)，运用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪全扫描得到其在正或负离子模式下的总离子流色谱图以及多级碎片信息。碰撞诱导裂解的过程可采用自动模式，软件会自动地基于一定的标准(如超过一定的丰度)选择母离子进行多级碎裂。在本发明中，三级碎裂的碎片离子信息就足以完成化合物结构分析，尽管高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪能够完成十级碎裂。