[发明专利]抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、 应用，是利用基因工程技术，制备抗日本血吸虫嵌合Fab抗体。嵌合Fab可变区 基因片段来自定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛 蚴膜的单克隆抗体NP11-4，利用基因工程技术扩增轻链、重链可变区基因，再 分别将重链可变区基因V_H与人IgG₁的C_H1、轻链可变区基因V_L与人IgG₁的C_L通过PCR扩增Fd及全长L，再将Fd及全长L通过重叠延伸PCR扩增出嵌合 Fab基因片段，嵌合Fab基因与载体pComb3XSS连接，构建出嵌合Fab的原核 表达载体，在大肠杆菌Top10F’中表达嵌合Fab抗体，用于制备日本血吸虫病的 治疗药物或制备抗日本血吸虫免疫毒素。本发明涉及抗体工程技术和血吸虫病的 治疗药物领域。

背景技术

危害人体的血吸虫主要有日本血吸虫、埃及血吸虫和曼氏血吸虫三种，主要 分别分布于亚洲(东部和南部)、非洲和南美洲广大地区，患病人数约2亿左右。 在我国流行的是日本血吸虫病，分布在长江流域及其以南的十二个省、市、自治 区。解放时全国约有一千余万患者，一亿人口受到本病威胁，有螺面积143亿平 方米，是危害农民健康最严重的寄生虫病。我国血吸虫病防治工作取得了很大 成绩。但目前长江中下游江湖洲滩地区及大山区的防治任务仍很艰巨，少部分地 区血吸虫病疫情有回升、扩展趋势，所以血吸虫病被列为我国“十一五”期间 重点防治的重大传染病。目前受血吸虫感染威胁人口约1亿，有现症病人84万， 作为重要传染源的牛、羊、猪也有数千万头，所以血吸虫病的防治任务非常艰巨。

日本血吸虫尾蚴、童虫、成虫和虫卵等阶段均可对人体产生不同程度的损伤 和复杂的免疫病理反应。一般来说，尾蚴、童虫、成虫所致的损伤，多为一过性 或较轻微，而虫卵沉积于肝、肠等组织内诱发的虫卵肉芽肿及随之发生纤维化是 血吸虫病的主要的病理基础。血吸虫抗原成分，如肠相关抗原、膜相关抗原和可 溶性虫卵抗原以及虫体代谢或死亡产物，都可引起机体变态反应性损伤。

目前血吸虫病的治疗以吡喹酮化疗为主，虽然吡喹酮的治疗可取得可靠疗 效，但急性血吸虫感染的死亡时有发生，慢性血吸虫病肝脏纤维化尚无有效的治 疗方法，可引起显著的门脉高压，由此导致的上消化道出血、脾肿大、腹水，是 引起患者死亡、丧失劳动力的主要原因。另外，单一化疗药物的长期使用可能出 现耐药性问题，长期应用还有可能诱发抗药虫株。因此，血吸虫病的治疗仍然存 在很多问题，直接影响国家的投资环境，影响和谐社会和小康社会的建设。所以， 探索新的高效低毒的血吸虫病治疗药物就显得尤为重要。

发明内容

本发明目的是针对上述不足之处提供一种抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合 Fab抗体及其制备方法、应用，是利用基因工程技术提取抗日本血吸虫单克隆抗 体NP11-4杂交瘤细胞总RNA，RT-PCR方法扩增V_H、V_L基因，利用PCR分 别将重链可变区基因V_H与人IgG₁的C_H1、轻链可变区基因V_L与人IgG₁的C_L扩增Fd及全长L，再将Fd及全长L通过重叠延伸PCR扩增出嵌合Fab基因片 段，将嵌合Fab基因与载体pComb3XSS连接，克隆至大肠杆菌Top10F’，诱导 目的蛋白可溶性表达。该蛋白应用于制备日本血吸虫病的治疗药物领域。

本发明抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用，制备 了定位于日本血吸虫成虫表膜、尾蚴膜、童虫膜、虫卵卵壳及卵内毛蚴膜的单克 隆抗体NP11-4，NP11-4为鼠源性单抗，作为异种蛋白用于人体可引起免疫反应， 产生人抗小鼠抗体(human anti-mouse antibody，HAMA)，诱发过敏反应。现通 过对鼠单抗NP11-4进行基因工程抗体改造，构建的嵌合Fab既具有抗原结合特 异性，又降低了鼠单克隆抗体的异源性，可应用于日本血吸虫病的治疗领域。

抗日本血吸虫单抗NP11-4嵌合Fab抗体及其制备方法、应用是采取以下方 案实现：