[发明专利]克氏原鳌虾阿肽西啶抗菌肽基因及其所编码的抗菌肽与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种阿肽西啶抗菌肽基因及其所编码的抗菌多肽与应用，尤其涉及一种克氏原鳌虾阿肽西啶(astacidin)抗菌肽基因及其所编码的抗菌多肽与所述基因在制备具有抗菌活性的重组蛋白中的应用；属基因工程技术领域。

背景技术

克氏原鳌虾(Procambarus clarkii)，俗称淡水小龙虾，是我国重要的水产养殖品种。小龙虾味道鲜美，磷、钙、铁等元素含量高，蛋白含量高，而脂肪含量低，是一种营养价值很高的经济型水产养殖品种。而且小龙虾的虾壳的提取物在工业，农业，医药和化工业中有着广泛的应用价值。因此，小龙虾的疾病预防和治疗方面的研究格外重要。小龙虾对环境的适应能力较强，对各种流行性的疾病有一定的抵抗能力，鉴于此研究小龙虾的抗菌肽对于我们了解虾类的抗病机制有着重要的作用。

虾类等节肢动物的免疫防御主要依赖于血细胞的活动，包括酚氧化酶原系统的激活，凝集系统的起始，和抗菌肽的合成。

Lee So Young等(JBC，2003)报道淡水小龙虾(Pacifastacus leniusculus)血蓝蛋白在酸性条件下水解C-端产生的抗菌肽astacidin1，具有广谱的抗菌活性，能抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的生长，在小龙虾体内注入脂多糖或者肽聚糖能加速血蓝蛋白分解为astacidin1；Pikul Jiravanichpaisal等(Developmental and ComparativeImmunology，2007)报道在淡水小龙虾(P.leniusculus)的血细胞和造血组织中的抗菌肽astacidin2和3和不同的甲壳肽(crustins)在小龙虾免疫反应中的作用。

诸多研究表明，在虾类等节肢动物中存在多种可以抵抗外界病原微生物的蛋白或肽类，如对虾素，甲壳肽(crustins)，含单一乳清酸性蛋白结构域的抗菌肽基因(SWD)和抗脂多糖因子(ALF)等。但是在相关的报导中，未见有克氏原鳌虾的阿肽西啶抗菌肽基因的报道。尽管国外在小龙虾(P.leniusculus)中也发现了类似的基因，但至今国内外没有克氏原鳌虾阿肽西啶抗菌肽基因及其重组表达和功能研究的报道。

发明内容

针对目前研究状况及其不足，本发明要解决的问题是提供一种克氏原鳌虾阿肽西啶(astacidin)抗菌肽基因及其所编码的抗菌多肽与所述基因在制备具有抗菌活性的重组蛋白中的应用。

本发明从克氏原鳌虾中克隆得到了阿肽西啶基因，并对其进行可性质、基因表达和定位以及重组表达等方面的研究，获得了有广谱抗菌活性的重组阿肽西啶(astacidin)。

本发明所述克氏原鳌虾阿肽西啶抗菌肽基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其中所示信息为：

(a)序列特征：

*长度：893碱基对

*类型：核酸

*链型：双链

*拓扑结构：线性

(b)分子类型：cDNA

(c)假设：否

(d)反义：否

(e)最初来源：克氏原鳌虾(Procambarus clarkii)

(f)序列描述：SEQ ID NO.1

acttgtggag cgactgactg ctgaagcaca attgttacaa gccccaacaa ctctatacca 60

ccaccatgcg tcttctccat ctcctgctga gtgttgccct cgttgctctt atggccgccg 120

tcccatccca ggcgtccaat ggttaccgtc ccgcctaccg tcctgcctac cgtcctagct 180

accgtccagg caagtaagag cgtgaagtaa cactcccgga cggcttccct tccctcttgg 240

ctggtcctct accatcacca gccacacctc cgcctccagc cacacctcca tctacaacag 300

gcatgcgata atcggtattc actatctaca aatgttgatc gctatcatcc agaggttcaa 360

gagcaagtag gccgacgtcc gccgatatgt cagccgtccg agaaaccaag gtggtcaggc 420

gtatggctgc tgacccctgc tcacgtctcc cgttgatgtc ctcctttgac tgacttcagt 480