[发明专利]新的镉离子人工抗原螯合剂制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的双功能螯合剂，尤其是镉离子人工抗原的新螯合剂的制备方法。 

背景技术

在重金属免疫分析技术中需进行人工抗原的合成，合成重金属人工抗原是利用双功能螯合剂先与重金属形成稳定的螯合物(半抗原分子)，再与载体蛋白质偶联形成重金属-螯合剂-载体蛋白质人工抗原，相对于重金属镉而言，目前已有的化合物中很难找到合适的双功能螯合剂，有的结构不太适合，有的价格过于昂贵，不易大量应用，阻碍了重金属镉人工抗原的有效合成。如CN10106337“重金属镉单克隆抗体的制备方法”中采用日本进口的1-(4-异硫氰苄基)乙烯基二胺-N，N，N’，N’-四乙酸作为镉离子的双功能螯合剂，售价高达300元/mg，推广与应用受到限制，故寻找具有自主产权的用于镉人工抗原合成的双功能螯合剂，并进而制备相应的单克隆抗体，进行重金属镉残留污染的快速检测具有十分重要的现实意义。 

发明内容

本发明的目的是提供一种针对重金属镉的双功能螯合剂6-  溴乙酰氨基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的制备方法，并公开基于此双功能螯合剂的人工抗原合成和单克隆抗体的制备方法和检测结果，以进一步验证本螯合剂在人工抗原合成中的应用效果。 

本发明的目的通过如下措施实现： 

新螯合剂BATDQ的制备方法包括如下步骤： 

1)6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉的合成： 

将2g4-硝基邻苯二胺和1.13g丁二酮放入250mL单口烧瓶中，以50mL无水乙醇为溶剂，加热回流2h，冷却至室温后抽滤，加30mL无水乙醇结晶提纯，所得产物即为6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉； 

2)6-硝基-2，3-二溴甲基喹喔啉的合成： 

取0.5g第一步产物6-硝基-2，3-二甲基喹喔啉、0.202g偶氮二异丁腈与1.14g N-溴代琥珀酰亚胺置于干燥的250mL单口圆底烧瓶中，再取40mL CCl₄加入烧瓶中，装上回流冷凝管，抽真空并用氩气保护，将烧瓶置于事先加热到80℃的油浴中，强力搅拌，并用火焰枪辅助加热使之快速回流，待反应完毕后，将混合物冷却至室温再过滤，取滤液放入水浴锅中蒸馏、冷却，得6-硝基-2，3-二溴甲基喹喔啉； 

3)6-硝基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成： 

在装有机械搅拌、回流冷凝管和恒压漏斗的三口烧瓶中，加  入1.99mL亚氨基二乙酸二乙酯、10mL干燥的乙腈和2.63g无水碳酸钾粉末，搅拌下向反应混合液中滴加溶有1.805g6-硝基-2，3-二溴甲基喹喔啉的10mL干燥的乙腈，回流8-10h，冷却，滤去碳酸钾，滤液减压下旋转蒸发回收溶剂，得淡黄色油状液体，往上述油状液中加入含3.48g Ba(OH)₂·8H₂O的饱和溶液，室温下充分搅拌至油状液均转化为白色沉淀，抽滤钡盐并用蒸馏水充分浸泡、洗涤。然后将此钡盐转移到15mL水中，将混合物加热煮沸，加入硫酸至清液中不再出现混浊，过滤除去硫酸钡，再用沸水煮洗硫酸钡残渣3次，将滤液和洗涤液合并，冰箱中冷却8-10h得到6-硝基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉； 

4)6-氨基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成： 

将100mL乙醇和2.025g6-硝基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉加入到250mL装有温度计、机械搅拌器的三口瓶中，搅拌加入1.2g钯碳催化剂和5.29g水合肼在80-85℃条件下反应4h后，趁热过滤，滤液经减压蒸去乙醇，冷却后所得固体用50mL苯重结晶，得到6-氨基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙 

酸)二甲胺基喹喔啉； 

5)6-溴乙酰氨基-2，3-(N，N，N＇，N＇-四乙酸)二甲胺基喹喔啉的合成：