[发明专利]一种羟基化类胡萝卜素的合成方法

权利要求书

1.一种来自耐辐射奇球菌的类胡萝卜素水合酶基因crtC，其特征在于具有SEQ ID No.1所述的核苷酸序列，该基因所编码的多肽具有SEQ ID No.2所述的氨基酸序列，所述序列与其他来源crtC的亲缘关系较低。

2.根据权利要求1所述基因的重组表达载体pRKcrtC的构建方法，其特征在于通过以下步骤实现：以提取的耐辐射奇球菌基因组DNA为模板，用Dr91、Dr92一对引物进行PCR扩增，PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳，回收和纯化片段，通过T-A克隆，经DNA测序鉴定后亚克隆到质粒pRK404中的HindIII和BamHI位点之间，连接后，以氯化钙沉淀法转化大肠杆菌DH5α，接种于含有四环素抗性的琼脂平皿，挑选阳性菌落，接种于2毫升含有氨苄的LB液体培养基中过夜，抽提质粒，得到表达载体pRKcrtC。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体的构建方法，其特征在于所述PCR法中使用了两条引物：

Dr91 5′AAGCTTGATGATCTCGCCCCCCCTCCTGC3′

Dr92 5′GGATCCGGTAGCCGTCCCACCACGACT3′。

4.根据权利要求2所述的重组表达载体在制备羟基化类胡萝卜素中的应用。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体的应用，其特征在于通过以下步骤实现的：

(1)将重组表达载体pRKcrtC以氯化钙沉淀法转化到能产生链孢红素的大肠杆菌中，接种于5毫升含有四环素和氯霉素的LB液体培养基中过夜，从而使所述类胡萝卜素水合酶基因crtC在大肠杆菌中表达并合成1-OH-链孢红素和1，1’-(OH)₂-链孢红素；

(2)将所述重组表达载体pRKcrtC以氯化钙沉淀法转化到能产生番茄红素的大肠杆菌中，接种于5毫升含有四环素和氯霉素的LB液体培养基中过夜，从而使crtC在大肠杆菌中表达并合成1-OH-番茄红素和1，1’-(OH)₂-番茄红素。