[发明专利]一种检测用生物标记物及应用

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种胃癌生物标记物及其在胃癌诊断中的应 用。

背景技术

胃癌是严重危害我国人民生命健康的重大疾病，其年龄标化发病率和死亡 率均居我国常见恶性肿瘤年龄标化发病率和死亡率的第二位。由于绝大多数胃 癌患者缺乏特异性临床症状，目前早期胃癌的诊断率较低，其病例仅占胃癌手 术病例的10-20％，就诊的患者大多处于胃癌的中晚期，其五年生存率仍徘徊 于20-30％。

胃癌的发生是机体遗传因素和外界环境因素相互作用、多基因参与、多步 骤发生的过程。近年研究结果显示，各分子事件之间存在以关键调控基因为重 要节点的多中心调控网络，这些重要节点通过各种信号传导通路参与正常胃粘 膜到胃癌这一复杂的演变过程。目前胃癌的临床诊断主要依据组织学形态观察 结果，而未应用胃癌特征性分子事件变化对上述病变进行分型和分级，因此上 述病变的分型和分级具有较大的人为主观性，且无法为患者提供个性化治疗。 而现有的肿瘤标记物如CEA、CA19-9、CA50、CA125在胃癌中的阳性率约 60％，但敏感性和特异性均不高，并与其他肿瘤存在交叉。因此，我们迫切需 要了解胃癌发生发展的分子机制，寻找新的生物标记物和药物靶标来早期诊断 胃癌和有效治疗胃癌。

MicroRNA(miRNA)是一类长度约19～25个核苷酸的非编码单链小分子 RNA，广泛存在于植物、线虫、果蝇和哺乳动物等生物中，主要通过不完全互 补的方式与编码蛋白mRNA的3’-UTR区结合引起靶mRNA的降解、活性降低 或翻译受抑，从而在转录后水平对基因表达进行调控。研究表明miRNA几乎在 所有的生物学过程中发挥重要的调控作用，包括个体发育、细胞增殖、分化、 代谢、凋亡和应激等。约50％的已知人类miRNA基因定位于和肿瘤相关的染色 体区域，而不断累积的研究成果也已充分证实miRNA的异常表达与肿瘤的发 生、发展密切相关。

最新的数据显示肿瘤组织普遍具有特征性的miRNA表达谱，即肿瘤细胞 某几种miRNA表达水平常与同一组织中的正常细胞存在显著的差异，而特征 性的miRNA异常表达可望作为有效工具用于肿瘤的诊断、病理分级、临床分 期、预后和对治疗的反应性等，显示了良好的临床应用前景。因此，开发一种 可辅助胃癌诊断的miRNA作为生物标记物，具有广泛的科研价值和临床应用 前景。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测用生物标记物，以检测样本中 microRNA-375(miR-375)的表达量作为生物标记，以miR-375表达量小于等 于0.2为临界值。

该生物标记物在胃癌组织中的表达量约为正常组织的四分之一。利用组织 中miR-375的表达量作为生物标记，检测胃癌的特异性达72.7％，敏感性达 82.8％。

本发明的另一个目的在于提供所述生物标记物在检测胃癌组织中的应用。

取氮冻存的组织1-3块，使用mirVana^TM miRNA Isolation试剂盒(美国 Ambion公司)提取总RNA，再使用miR-375特异的Taqman MicroRNA Assays (美国Applied Biosystems公司)试剂盒进行实时荧光定量PCR检测；采用相对 定量的方法，得到目标组织相对于参照组织miR-375的含量，参照组织为病理 确诊后的正常胃组织；以0.2为临界值，miR-375表达量小于等于0.2的组织检 测认为是肿瘤组织，大于0.2的组织检测认为是非肿瘤组织。

本发明的有益效果在于：1.提供的该生物标记物在胃癌组织中的表达量仅 为正常组织的四分之一，该生物标记物的特异性72.7％，敏感性82.8％，具有 敏感性和特异性高，操作方便等特点，有较高的诊断参考价值。2.有助于揭示 肿瘤发生发展的分子生物学机制，为肿瘤的个体化靶向治疗奠定基础。

附图说明

图1：手术胃癌组织中miR-375的相对定量。

图2：胃镜组织中miR-375的相对定量。

图3：胃镜组织中miR-375的相对定量(非肿瘤组vs.肿瘤组)。

具体实施方式

本发明结合实施例和附图作进一步的说明。

实施例1

1、组织样品的准备