[发明专利]一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱法，尤其涉及一种茚满二酮类鼠药杀鼠酮及其位置异构体的高效液相色谱分离测定方法。

背景技术

杀鼠酮(2-新戊酰--1，3-茚二酮，Pindone)为茚满二酮类抗凝血类鼠药，具有适口性好、靶谱广、对人畜安全等优点，对家鼠、野鼠均有良好的杀灭作用，目前已广泛用于家庭和农业灭鼠。其分子式：C₁₄H₁₄O₃；分子量：230.26；其化学结构式如下：

杀鼠酮的位置异构体为异杀鼠酮(2-特戊酰--1，3-茚二酮，Valone)，其化学结构式为：

目前杀鼠酮的合成主要由邻苯二甲酸酯与甲基异丁基酮反应制得(田明祥，辽宁化工，1999，28(2)：122-123)或由邻苯二甲酸酯与偏二芳烃基丙酮反应制得(CN1074897)，但不管采用哪一种形式的合成路线均不可避免地含有以杂质形式存在的位置异构体，为控制最终产品的质量，建立位置异构体的分离分析方法，对生产过程的质量控制非常重要。

常规分离位置异构体的方法常常采用专用色谱柱进行分离，不但成本高而且分离难度大，分离时间长，有时需添加不挥发性无机盐缓冲液进行流动相的改性，造成与质谱检测器的不相容性。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，本发明的方法可用于杀鼠酮和异杀鼠酮的生产过程、最终产品的质量控制、临床毒物诊断和环境分析等各个领域。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，包含以下步骤：

(1)取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品，并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01～10mg的样品溶液。

(2)以普通C18色谱柱为固定相，缓冲液-低级醇溶液为流动相，对样品溶液进行杀鼠酮或异杀鼠酮位置异构体的分离测定；设置流动相的流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为250～300nm，色谱柱柱温为20～50℃。

进一步地，所述普通C18色谱柱是牌号为XDB C18或XBridge C18的色谱柱。

进一步地，所述缓冲液-低级醇溶液的体积比为2:98～50:50。

进一步地，所述低级醇为甲醇、乙醇或异丙醇，优选为甲醇。

进一步地，所述缓冲液包括一种弱酸盐和一种有机酸，弱酸盐为乙酸铵、甲酸铵或碳酸氢铵，其浓度为1.0～200mmol/L。有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸，其体积比浓度为0.01～2％。

进一步地，所述流动相的流速优选为1.0mL/min，色谱柱柱温优选为30℃，最佳检测波长优选为280nm。

本发明的有益效果是：本法采用普通C18色谱柱，以一种可挥发性的弱酸盐缓冲液对流动相进行改性快速准确地实现了杀鼠酮和异杀鼠酮位置异构体的分离与测定，从而实现了杀鼠酮中微量位置异构体(异杀鼠酮)和异杀鼠酮中微量位置异构体(杀鼠酮)的控制和分离，保证了杀鼠酮和异杀鼠酮产品的质量可控和临床中毒病人的毒物鉴定需求。

附图说明

图1为流动相为甲醇/乙酸铵-乙酸缓冲液(5mmol/L，pH＝5.5)＝(70:30，v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在6.2min左右。

图2为流动相为乙醇/甲酸铵-甲酸缓冲液(50mmol/L，pH＝5.5)＝(60:40，v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在7.0min左右。

图3为流动相为甲醇/碳酸氢铵-乙酸缓冲液(10mmol/L，pH＝5.0)＝(50:50，v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在10.0min左右。

图4为流动相为异丙醇/乙酸铵-三氟乙酸缓冲液(100mmol/L，pH＝5.5)＝(90:10，v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在13.2min左右。

具体实施方式

本发明用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，包含以下步骤：

1.取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品，并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01～10mg的样品溶液。