[发明专利]一种特定微生物的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物的检测，特别涉及一种特定微生物的检测方法，如细菌和真菌的检测。

背景技术

食品安全目前已成为人们非常关注的一个问题。据统计，在各种食品安全问题中，由于微生物污染，特别是有害、致病微生物污染所引起的占了很大的比例。因此，需要专门的技术检测食品中的微生物。

目前，食品中微生物检测的常规方法，大多数是以培养活的细胞生长为手段来达到检测目的，如平板菌落计数法等。虽然这些方法检测灵敏度很高，但这些方法均需要在实验室的无菌条件下进行，并且需要一定的培养时间，所以比较麻烦和费时，需要24小时或者更长的时间才能有结果。

在食品安全检测中，人们总希望尽快得到检测结果。若是像平板菌落计数法一样，所得到的结果往往只能作为事后的辅助验证了。

为了解决常规检测方法耗时长的不足，人们也开始研究各种快速的微生物检测方法，并得到了一定的结果，如：

ATP生物发光法，就是利用微生物细胞内存在的ATP即三磷酸腺苷，当荧光素酶系统和ATP接触时会发光，这样通过光强度的检测就可以推知样品中微生物的含量。

法国梅里埃公司推出了一种微生物生长过程中由于新陈代谢而改变培养基的成分，从而通过电阻抗的测量来达到微生物快速检测的Bactometer系统。与此相类似的还有Malthus的Malthus Microbial Analyser系统。

另外，随着免疫技术和分子生物学的发展，人们也开发出一些基于免疫反应或PCR技术的微生物检测技术。

但是，上述技术，特别是快速检测技术，还存在诸多不足，如：

1、目前所研究开发的快速检测方法中，检测时间还较长，检测灵敏度还比较低。

2、这些快速技术都是针对总菌进行检测的，对某一种或某一类特定菌的检测并没有报道，而在实际应用中，人们所需要测量绝大多数为特定的一种或一类细菌，如大肠杆菌、致病性大肠杆菌等，因为只有知道了细菌的具体种类，才有可能采取相应的办法进行处理。现在，随着免疫技术的发展，人们也开发出针对特定菌的快速免疫检测方法，但是，这类方法都需要两个抗体，首先是一个针对某一种或某一类特定菌的检测抗体，然后是一个用于信号检测的酶标抗体，比较复杂。

发明内容

为了解决现有技术中的上述不足，本发明提供了一种检测精度高、可检测特定微生物、检测灵敏度高的某一种或某一类特定微生物的检测方法。由于本发明所提供的方法不需细胞培养，所以也是一种快速的细菌检测方法。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种特定微生物的检测方法，包括以下步骤：

a、捕捉步骤

选择对应于特定微生物种类的抗体，通过抗体和特定种类微生物之间的特异性反应捕捉被测样本中的特定微生物；

b、分离步骤

分离捕捉到的特定微生物和被测样本；

c、酶释放步骤

向分离后特定微生物的溶液中加入过氧化氢酶释放试剂，使得所述特定微生物中的过氧化氢酶释放，进入溶液中；

d、检测步骤

向上述溶液中添加过氧化氢，并等待；

检测得到过氧化氢酶的浓度，进而得到所述特定微生物的浓度。

作为优选，在所述步骤b中，利用免疫磁珠或免疫层析方法实现分离。

作为优选，在所述步骤d中，通过检测过氧化氢浓度的变化，从而得到过氧化氢酶的浓度。

作为优选，利用压力传感器或电化学方法来检测过氧化氢浓度的变化。

本发明的技术构思是：利用免疫反应捕捉特定微生物种类，然后分离特定微生物(一种或一类)和被测样本；再利用特定微生物自身含有的过氧化氢酶进行检测，从而避免了一般免疫检测中需要额外的第二抗体进行标记的弊端。同时，通过对过氧化氢酶催化底物的检测，充分利用酶的信号放大作用，实施高灵敏的检测。

如图1所示，第一步，通过抗原(特定微生物种类)和抗体(对应于特定种类微生物)之间的特异性反应，有选择的捕捉被测样本中的特定微生物。由于抗体和抗原间特异性反应的高度选择性，这样就保证了能够按实际要求检测特定微生物。