[发明专利]在转基因哺乳动物的奶中生产外源蛋白的方法以及从其中纯化蛋白的方法

权利要求书

1.生产蛋白质的方法，包括：

a)制造在其奶中产生目标蛋白的非人转基因哺乳动物；

b)从所述非人转基因哺乳动物获得所述奶；和

c)从所述奶中纯化所述目标蛋白。

2.根据权利要求1的方法，其中所述的非人转基因哺乳动物是通 过以下方法制得的，该方法包括：

a)获得编码目标蛋白的基因；

b)将所述基因克隆至质粒中，借此将所述基因可操作地连接至指 导所述基因在乳房细胞中表达的启动子，形成表达质粒；

c)用所述表达质粒转染体细胞，使得所述质粒掺入到所述体细胞 的基因组中，得到转基因体细胞；

d)将成熟卵母细胞去核，得到去核的卵母细胞；

e)将一个所述的转基因体细胞与所述去核的卵母细胞融合，得到 单细胞胚胎；

f)将所述胚胎植入受体哺乳动物的子宫中；和

g)监控怀孕直至转基因哺乳动物的出生。

3.权利要求2的方法，其中所述启动子是β酪蛋白启动子，而其 中所述的目标蛋白是人生长激素。

4.权利要求3的方法，其中表达质粒是pRβhGH。

5.权利要求4的方法，其中所述表达质粒进一步包含新霉素抗性 基因。

6.权利要求5的方法，其中所述表达质粒是pRNeo。

7.权利要求2的方法，其中所述哺乳动物是在其奶中产生重组人 生长激素的牛，其基因组包含整合的质粒，其中所述的质粒包含人生长 激素基因和指导所述基因在所述哺乳动物的乳房细胞中表达的β酪蛋 白启动子。

8.权利要求7的方法，其中所述质粒是pR β hGH。

9.权利要求8的方法，其中所述质粒进一步包含新霉素抗性基因。

10.权利要求9的方法，其中所述质粒是pRNeo。

11.权利要求2的方法，其中所述体细胞是成纤维细胞。

12.权利要求2的方法，其中经从在其奶中产生所述目标蛋白的转 基因雌性中分离来获得所述的转基因体细胞。

13.权利要求12的方法，其中所述转基因体细胞是成纤维细胞。

14.根据权利要求1的方法，其中所述非人转基因哺乳动物通过以 下方法制得，该方法包括：

a)使在其奶中产生所述目标蛋白的转基因雌性非人哺乳动物超排 卵；

b)将所述哺乳动物与从雄性非人非转基因哺乳动物获得的精子人 工授精来产生胚胎；

c)收集所述胚胎；

d)将所述胚胎植入受体哺乳动物的子宫中；和

e)监控怀孕直至转基因哺乳动物的出生。

15.根据权利要求1的方法，其中所述非人转基因哺乳动物通过以 下方法制得，该方法包括：

a)使在其奶中产生所述目标蛋白的转基因雌性非人哺乳动物超排 卵；

b)将所述哺乳动物与从产生所述目标蛋白的转基因雄性非人哺乳 动物获得的精子人工授精来产生胚胎；

c)收集所述胚胎；

d)将所述胚胎植入受体哺乳动物的子宫中；和

e)监控怀孕直至转基因哺乳动物的出生。

16.根据权利要求1的方法，其中所述非人转基因哺乳动物通过以 下方法制得，该方法包括：

a)使雌性非人非转基因哺乳动物超排卵；

b)将所述哺乳动物与从产生所述目标蛋白的转基因雄性非人哺乳 动物获得的精子人工授精来产生胚胎；

c)收集所述胚胎；

d)将所述胚胎植入受体哺乳动物的子宫中；和

e)监控怀孕直至转基因哺乳动物的出生。

17.权利要求2、12、14、15或16任一项的方法，其中所述哺乳 动物属于牛物种、猪物种、绵羊物种、山羊物种或啮齿动物物种。