[发明专利]二聚桔霉素类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及用桔青霉HGY1-5(Penicillium citrinum HGY1-5)(保藏编号是：CCTCC M 208170，保藏日期：2008年10月27日)生产二聚桔霉素类化合物的方法；本发明还涉及该 类化合物在制备细胞增殖抑制剂、细胞凋亡诱导剂或抗肿瘤剂中的用途。

背景技术：

桔霉素是由桔青霉(Penicillium citrinum)或一些曲霉(Aspergillus sp.)生产的一种活性聚 酮化合物，其二聚体目前报道了5个，但是这种5个六元环相互稠合形成的新颖的桔霉素 二聚体未见报道。本发明人研究得知，桔青霉HGY1-5(Penicillium citrinum HGY1-5)(保藏 编号是：CCTCC M 208170)液体发酵产物经超声破碎后的粗提物有很好的细胞增殖抑制和 细胞凋亡诱导活性，遂对其活性成分进行了研究。研究发现所示二聚桔霉素类化合物具有 抗肿瘤活性，目前尚未见该化合物的化学结构及细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导活性的报道， 因此市场上也尚未见有与此有关的药物。

发明内容：

本发明旨在提供两种结构独特的具有抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡作用，具 有抗肿瘤活性的新化合物。其结构式分别是

式I

式II

其结构特征是：式I和式II是由5个六元环相互稠合形成的新颖的桔霉素二聚体，其 中R-R₃为氢、氨基、羟基、烷氧基、酰氧基或酰氨基。

本发明优选的式I和式II化合物其中R、R₁为羟基、R₂为甲氧基、R₃为氢。

本发明的式I和式II化合物可通过微生物发酵培养来获取含有二聚桔霉素类化合物的 发酵物，然后从发酵物中采用硅胶柱层析、Sephadex LH20凝胶柱层析制备HPLC等方法分 离纯化得到。

本发明的下述实施例中列举了利用桔青霉HGY1-5(Penicillium citrinum HGY1-5)(保藏 编号是：CCTCC M 208170)制备本发明式I和式II化合物的实例。

具体实施方式：

在如下的实施例中所指的化合物I和II的化学结构(结构式中的阿拉伯数字是化学结构 中碳原子的标位)分别是：

化合物I                                          化合物II

实施例1化合物I和II的发酵生产及分离精制

1发酵生产

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取桔青霉HGY1-5(Penicillium citrinum HGY1-5)(保藏编号是：CCTCC M 208170)适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在28摄氏 度培养箱中培养4天。

取斜面培养4天的桔青霉HGY1-5(Penicillium citrinum)适量，接种到装有200mL培养 液[培养基组成(克/升)：麦芽糖20.0，甘露醇20.0，味精10.0，KH₂PO₄0.5，MgSO₄0.3， 酵母膏3.0，pH自然]的500mL锥型瓶中，在28℃、160转/分钟条件下摇床培养15天，获 得菌丝体和发酵液。

2浸膏的获得

用棉布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液等体积乙酸乙酯萃取三次，再用正丁醇萃取 三次，将正丁醇萃取液减压浓缩，得粗浸膏，共100.0克。

3化合物的分离精制

浸膏(100.0克)用氯仿-甲醇混合溶剂溶解后，加300克200-300目硅胶(青岛海洋化 工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮，氯仿， 氯仿-甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为12个流份。Fr-7(12.0g，氯仿-甲醇20∶1洗脱物)， 先后以氯仿-甲醇(1∶1)为溶剂进行LH20柱层析，再经加压硅胶柱层析以石油醚∶丙酮(5∶ 5)为溶剂，最后经半制备反相高效液相色谱(甲醇∶水＝80∶20)得化合物I(100mg)和 化合物II(80mg)。