[发明专利]一种适用于拟南芥根系蛋白质组学研究的无菌水培方法

权利要求书

1.一种适用于拟南芥根系蛋白质组学研究的无菌水培方法，其特征是：采用锥形塑料组织培养瓶和80目不锈钢筛网为栽培容器，注入水培营养液，并以注射针头和过滤器作为通气装置，通过在无菌工作台上完成播种与培养过程，获得拟南芥的完整健康根系；

其中栽培容器制作方法如下：首先，以80目不锈钢筛网为栽培支持物，裁剪成12×4cm的长方形，折叠为U型；然后，将不锈钢筛网插入锥形塑料组织培养瓶中，注入水培营养液，筛网底部与营养液面保持5mm间隙；最后，盖好通气盖后湿热高压灭菌；

其中水培营养液配制方法如下：在1/4霍格兰氏水培营养液中添加2.5％浓度的蔗糖；

其中通气装置制作方法如下：首先，在组织培养瓶盖边缘处插入已灭菌的连有0.2μm过滤器的5号注射针头至瓶底；然后，用Parafilm膜封紧针头与瓶盖间的缝隙；最后，在过滤器另一端连接软管至通气泵；

其中播种方法如下：首先，在无菌工作台上，将种子置于灭过菌的离心管中，用70％乙醇浸泡灭菌30秒，吸出乙醇；其次，用10％NaClO浸泡灭菌5分钟；然后，用无菌水清洗5次，每次30秒；最后，将灭菌后的种子悬浮于含1％琼脂糖和20％蔗糖的高密度溶液中，置于加热器上保持50℃，用1000μL移液枪，吸入种子，均匀的点到培养瓶的筛网上，间隔1cm；

其中培养方法如下：首先，将培养瓶置于4℃冰箱中低温避光处理48小时；然后，将培养瓶转移到人工气候箱中，设置光周期为16小时光照，8小时黑暗，光强110μmol.^-2.s^-1，光照下温度为22℃，黑暗下温度为18℃，相对湿度70％，每日间隔7小时通气1小时，水培营养液每周更换1次。