[发明专利]猪圆环病毒1型感染性克隆及其所拯救的病毒和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒的感染性克隆，尤其涉及猪圆环病毒1型感染性克隆以及由该感染性克隆拯救得到的重组猪圆环病毒1型病毒，本发明还涉及该感染性克隆的构建方法以及其用该感染性克隆拯救的病毒在诊断技术中的应用，属于病毒分子生物学及兽医免疫学领域。 

背景技术

根据猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)的致病性、抗原性及核苷酸序列，可以将其分为两个基因型，即PCV1和PCV2。PCV1由德国学者Tischer等(1974)首次从污染的猪肾传代细胞系(PK-15)分离获得，通过人工感染猪试验证实，该病毒没有引起显著临床症状和病理变(Tischer I，Gelderblom H，Vetteermann W，et al.A very small porcine virus with circular single-strandedDNA[J].Nature，1982，295：64-66；Tischer I，Mields W，Wolff D，et al.Studies onepidemiology and pathogenicity of porcine circovirus[J].Arch Virol，1986，91：271-276.)。PCV2从断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)患猪分离获得，证实对猪具有致病性(Allan G，Meehan B，Todd D，et al.Novel porcine circoviruses from pigs with wastingdisease syndromes[J].Vet Record，1998，142：467-468.)。猪圆环病毒是一种圆形小颗粒病毒，直径17nm，呈二十面体对称，无囊膜，基因组由单股负链闭合环状DNA组成，PCV1含有1759bp，PCV2含有1767或1768bp。病毒基因组包括两个大的开放阅读框架(ORFs)，ORF1基因编码病毒复制酶相关蛋白(Rep)，ORF2基因编码病毒结构蛋白(Cap)(Cheung A K.Transcriptional analysis ofporcine circovirus type 2[J].Virology，2003，305：168-180.)。PCV1和PCV2全基因组序列的同源性为67％，在ORF1区段同源性为86％，而ORF2区段同源性仅为51％(Meehan B M，Creelan J L，McNulty M S，et al.Sequence of porcine circovirusDNA：affinities with plant circoviruses[J].J General Virol，1997，78：221-227.)。 两种病毒在ORF1所编码的蛋白抗原存在交叉，而ORF2所编码的蛋白抗原不存在交叉(MahéD，Blanchard P，Truong C，et al.Differential recognition of ORF2protein from type1and type 2 porcine circoviruses and identification ofimmunorelevant epitopes[J].J General Virol，2000，81：1815-1824.)。因此，PCV1与PCV2之间存在有一定亲缘关系，但也发生了较大的遗传变异。由于PCV2感染猪会导致PMWS或其它症候群成为研究热点，而PCV1的研究报道较少。为深入了解PCV1与PCV2遗传变异，探讨PCV1与其它病原混合感染的致病性，调查我国兽用疫苗中PCV1污染情况，需要开展该病毒的研究。 

近年来，国内外学者采用不同方式构建了PCV2的感染性克隆，但拯救的毒株均无分子靶标设计，其获得的毒株也无法与亲本病毒相鉴别(Fenaux M，Opriessing T，Halbur P G，et al.A chimeric porcine circovirus(PCV)with theimmunogenic PCV type 2(PCV2)cloned into the genomic backbone of thenonpathogenic PCV1 induces protective immunity against PCV2 infection in pigs[J].J Virol，2004，78：6297-6303.)。