[发明专利]微粒体组合物及其生产方法

说明书

本申请是国际申请号为PCT/US 01/30541、国际申请日为2001年9月28日，进入中国国家阶段的申请号为01816557.5，名称为“微粒体组合物及其生产方法”的发明专利申请的分案申请。

相关申请描述

本申请涉及2000年9月28日申请的专利申请序列号60/236,077的相关申请，该申请在这里全部引入，以作参考。

技术领域

本发明总的涉及药物组合物。具体地说，本发明涉及具有吸附表面的微粒体、制备这种微粒体的方法及其应用。另外，本发明涉及含有可生物降解的微粒体的组合物，其中生物活性剂如治疗用的多核苷酸、多肽、抗原和佐剂都吸附在微粒体的表面。

背景技术

为了获得受控的、胃肠外传递的治疗用化合物，使用了微粒载体。将这种载体设计为在传递系统中长时间地保持活性剂。微粒载体的例子包括衍生自聚甲基丙烯酸甲酯聚合物的微粒载体，以及衍生自聚(丙交酯)(见美国专利3,773,919)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(被称做PLG，见美国专利4,767,628)和聚乙二醇(被称作PEG、见美国专利5,648,095)的微粒体。聚甲基丙烯酸甲酯聚合物是不可降解的，而PLG颗粒则通过酯键的随机非酶促水解成乳酸和羟基乙酸而被生物降解，所生成的乳酸和羟基乙酸沿着正常的代谢途径排泄。

例如，美国专利5,648,095描述了具有胶囊化药物的微球体作为药物传递系统在鼻、口、肺和口腔的传递中的用途。还描述了含有各种多肽生长因子的缓释制剂。见例如，国际出版号WO 94/12158，美国专利5,134,122和国际出版号WO 96/37216。

Fattal等，Journal of Controlled Release 53：137-143(1998)描述了从吸附了寡核苷酸的聚烷基氰基丙烯酸酯(PACA)制备的极小颗粒。

还已使用了具有吸附或嵌入抗原的微粒载体，试图引发适当的免疫反应。这种载体给免疫系统提供了一个选择性抗原的多个拷贝，并促进局部淋巴结中抗原的引入和保持。这些颗粒可以被巨噬细胞吞噬，并且可以通过细胞因子释放增强抗原表达。例如，共同拥有的1998年1月29日的待授权申请09/015,652描述了使用吸附了抗原和包裹了抗原的微粒体刺激细胞介导的免疫反应，以及制备这类微粒体的方法。

例如，在共同拥有的1998年1月29日申请的待授权美国专利申请序列号第09/015,652中，公开了一种微粒体的形成方法，它包括将聚合物与有机溶剂混合，然后加入乳液稳定剂，如表面活性剂聚乙烯醇(PVA)，然后蒸发有机溶剂，即形成微粒体。微粒体的表面具有聚合物和稳定剂。然后使大分子如DNA、多肽和抗原吸附到这些微粒体的表面上。

美国专利5,814,482和6,015,686公开了真核生物分层载体起始系统(ELVIS载体)，特别是从α病毒基因组(如新培斯病毒)衍生和构建得到的载体，用于刺激针对抗原的免疫反应、抑制病原体的方法、以及向(尤其是)真核生物的细胞和动物传递异源核苷酸序列。

共同拥有的国际专利申请PCT/US99/17308和待授权美国专利申请09/715,902公开了吸附了大分子的微粒体的制备方法，这些大分子例如药物、多核苷酸、多肽、蛋白质、激素、酶、转录介体或翻译介体、代谢途径中间物中间物、免疫调节剂、抗原、佐剂或它们的组合物等。微粒体包含如聚(α-羟基酸)(如PLG)、多羟基丁酸、聚己内酯、聚原酸酯、聚酐等的聚合物，并使用如阳离子、阴离子或非离子去污剂制成。

虽然吸附了抗原的PLG微粒体比其它更毒的系统提供了重要的优越性，但是生物活性剂在微粒体表面上的吸附仍需改进。例如，将如多核苷酸、大的多肽等带电的或庞大的生物活性剂吸附到微粒体的表面常常很困难或不可能。因此，仍需要用于这种制剂、尤其是用于高度敏感又难以配制的药物的灵活的传递系统。

发明内容

本发明人发现，通过确保在吸附时存在与大分子形成复合物的去污剂，从而可提高大分子与微粒体的吸附。该存在可以通过例如在大分子吸附时分别提供一定量的去污剂，或者确保生产微粒体的方法产生含有大量游离去污剂的产物而得以完成。这一方法与以前的技术方法有差别，在以前的方法中，在吸附大分子前，微粒体被彻底清洗，以除去残余的去污剂。例如，在上述PCT/US99/17308的实施例中，在暴露于感兴趣的大分子前，先用水洗涤微粒体多次(即用水离心洗涤4次)，这样的洗涤步骤基本上全部除去了游离的去污剂，结果在最终产物中99％以上的剩余的去污剂与微粒结合。