[发明专利]干酪乳杆菌Zhang高密度培养方法、使用它们制备冻干菌粉的方法与所得到的冻干菌粉及其用途

权利要求书

1、一种干酪乳杆菌Zhang的高密度培养方法，其特征在于该方法步骤如下：

a.菌种活化：

将冷冻保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)CGMCC 1697接种于MRS液体培养基中，在温度37℃下培养18-24小时，如此传代培养1-2次得到所述的活化干酪乳杆菌Zhang菌种；

b.培养基的配制：

首先，分别称取下述原料：60-90重量份一水合葡萄糖、8-12重量份酵母粉、8-12重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、2.0-2.5重量份柠檬酸钠、0.8-1.0重量份MgSO₄.7H₂O、0.04-0.08重量份MnSO₄.5H₂O与0.8-1.0重量份吐温-80；

然后，将上述原料溶于1000重量份水中，搅拌均匀，再使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6，再在温度120-122℃下灭菌15分钟，这样得到所述的培养基；

c.菌种发酵液的制备：

以使用所述的培养基重量计，按照1-3重量％将步骤a)得到的活化干酪乳杆菌Zhang菌种接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度37℃下培养8-10小时得到干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液；

d.发酵：

以使用所述的培养基重量计，按照4-10重量％将步骤c)得到的所述干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度35-37℃下进行发酵8-16小时，在所述的发酵过程中通过流加中和剂将该发酵介质的pH保持在5.8-6.5，同时保持微通氧或厌氧的条件；

e.终止发酵：

所述发酵介质的pH不再降低与中和剂流加停止时，就终止发酵，于是得到所述的干酪乳杆菌Zhang活菌数达10¹⁰cfu/ml以上的干酪乳杆菌高密度发酵液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的中和剂是一种或多种选自NaOH、KOH或氨水的中和剂，所述中和剂的浓度是15-40重量％。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在所述的发酵过程中通过流加中和剂将该发酵介质的pH保持在5.8-6.2。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于所述干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液接种于在步骤b)得到的所述培养基中，在温度37℃下进行发酵10小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的微通氧是通空气0.02-0.05vvm或每两小时以0.03-0.1vvm量通空气一次。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的厌氧发酵是通氮气0.02-0.05vvm或每两小时以0.03-0.1vvm量通氮气一次。

7.一种干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉的制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

a.所述干酪乳杆菌Zhang高密度发酵液的浓缩：

让根据权利要求1-6中任一项权利要求所述方法制备的干酪乳杆菌Zhang高密度发酵液在室温下在5000-12000g条件下离心5-30分钟，得到干酪乳杆菌Zhang菌体浓缩液；

b.添加保护剂：

往步骤a)得到的干酪乳杆菌Zhang菌体浓缩液添加以重量计5-10倍的浓度18-25重量％的保护剂水溶液，得到干酪乳杆菌Zhang菌体悬液；

c.干燥：将上述步骤b)得到的所述干酪乳杆菌Zhang菌体悬液在温度-10℃～-50℃下进行冷冻干燥，得到所述的干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的保护剂选自脱脂乳粉、甘油、维生素C、谷氨酸、山梨醇、海藻糖或乳糖。

9.根据权利要求7或8所述方法得到的干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉，其特征在于它含有10¹¹cfu/ml以上的所述干酪乳杆菌Zhang总活菌数。

10.根据权利要求9所述的酪乳杆菌Zhang冻干菌粉在益生菌发酵剂或益生菌制剂中的用途。