[发明专利]干酪乳杆菌Zhang高密度培养方法、使用它们制备冻干菌粉的方法与所得到的冻干菌粉及其用途无效
申请号: | 200810175856.7 | 申请日: | 2008-11-06 |
公开(公告)号: | CN101418270A | 公开(公告)日: | 2009-04-29 |
发明(设计)人: | 张和平;李妍;高鹏飞;赵文静 | 申请(专利权)人: | 内蒙古农业大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;A61K35/74;A61K9/19;A61P1/00;A61P3/06;A61P35/00;A61P37/04;A61P43/00;C12R1/245 |
代理公司: | 北京君智知识产权代理事务所 | 代理人: | 向 华 |
地址: | 010018内蒙古自治区呼和浩特*** | 国省代码: | 内蒙古;15 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 干酪 杆菌 zhang 高密度 培养 方法 使用 它们 制备 冻干菌粉 得到 及其 用途 | ||
1、一种干酪乳杆菌Zhang的高密度培养方法,其特征在于该方法步骤如下:
a.菌种活化:
将冷冻保存的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei Zhang)CGMCC 1697接种于MRS液体培养基中,在温度37℃下培养18-24小时,如此传代培养1-2次得到所述的活化干酪乳杆菌Zhang菌种;
b.培养基的配制:
首先,分别称取下述原料:60-90重量份一水合葡萄糖、8-12重量份酵母粉、8-12重量份大豆蛋白胨、3.0-3.5重量份磷酸氢二钾、13-15重量份乙酸钠、2.0-2.5重量份柠檬酸钠、0.8-1.0重量份MgSO4.7H2O、0.04-0.08重量份MnSO4.5H2O与0.8-1.0重量份吐温-80;
然后,将上述原料溶于1000重量份水中,搅拌均匀,再使用中和剂将其pH值调节到6.4-6.6,再在温度120-122℃下灭菌15分钟,这样得到所述的培养基;
c.菌种发酵液的制备:
以使用所述的培养基重量计,按照1-3重量%将步骤a)得到的活化干酪乳杆菌Zhang菌种接种于在步骤b)得到的所述培养基中,在温度37℃下培养8-10小时得到干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液;
d.发酵:
以使用所述的培养基重量计,按照4-10重量%将步骤c)得到的所述干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液接种于在步骤b)得到的所述培养基中,在温度35-37℃下进行发酵8-16小时,在所述的发酵过程中通过流加中和剂将该发酵介质的pH保持在5.8-6.5,同时保持微通氧或厌氧的条件;
e.终止发酵:
所述发酵介质的pH不再降低与中和剂流加停止时,就终止发酵,于是得到所述的干酪乳杆菌Zhang活菌数达1010cfu/ml以上的干酪乳杆菌高密度发酵液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的中和剂是一种或多种选自NaOH、KOH或氨水的中和剂,所述中和剂的浓度是15-40重量%。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于在所述的发酵过程中通过流加中和剂将该发酵介质的pH保持在5.8-6.2。
4.根据权利要求1所述方法,其特征在于所述干酪乳杆菌Zhang菌种发酵液接种于在步骤b)得到的所述培养基中,在温度37℃下进行发酵10小时。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的微通氧是通空气0.02-0.05vvm或每两小时以0.03-0.1vvm量通空气一次。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于所述的厌氧发酵是通氮气0.02-0.05vvm或每两小时以0.03-0.1vvm量通氮气一次。
7.一种干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉的制备方法,其特征在于该方法的步骤如下:
a.所述干酪乳杆菌Zhang高密度发酵液的浓缩:
让根据权利要求1-6中任一项权利要求所述方法制备的干酪乳杆菌Zhang高密度发酵液在室温下在5000-12000g条件下离心5-30分钟,得到干酪乳杆菌Zhang菌体浓缩液;
b.添加保护剂:
往步骤a)得到的干酪乳杆菌Zhang菌体浓缩液添加以重量计5-10倍的浓度18-25重量%的保护剂水溶液,得到干酪乳杆菌Zhang菌体悬液;
c.干燥:将上述步骤b)得到的所述干酪乳杆菌Zhang菌体悬液在温度-10℃~-50℃下进行冷冻干燥,得到所述的干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于所述的保护剂选自脱脂乳粉、甘油、维生素C、谷氨酸、山梨醇、海藻糖或乳糖。
9.根据权利要求7或8所述方法得到的干酪乳杆菌Zhang冻干菌粉,其特征在于它含有1011cfu/ml以上的所述干酪乳杆菌Zhang总活菌数。
10.根据权利要求9所述的酪乳杆菌Zhang冻干菌粉在益生菌发酵剂或益生菌制剂中的用途。
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