[发明专利]不含异源成分的gM-阴性EHV突变体

说明书

此案是申请日为2003年07月16日、中国申请号为03817221.6、发明名称为“不含异源成分的gM-阴性EHV突变体”的发明申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及动物健康领域，特别是涉及编码gM蛋白的基因缺失且不含异源成分(heterologous element)的马疱疹病毒(Equine Herpes Viruse)(EHV)。本发明进一步涉及包含所说病毒的药用组合物及其应用，以及预防和治疗EHV感染的方法。本发明也涉及包含EHV-1和EHV-4病毒的药用组合物，其中编码gM蛋白的基因缺失，并且不含有异源成分。

背景技术

马疱疹病毒1(EHV-1)，作为α疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae)的成员，是马中病毒引起流产的主要原因，它也可引起呼吸和神经系统疾病。马疱疹病毒4(EHV-4)也可引起呼吸系统疾病，流产，或神经系统疾病。已经鉴定出了两种类(EHV-1：菌株Ab4p；EHV-4：菌株NS80567)的DNA全序列(Telford，E.A.R.et al.，1992；Telford，E.A.R.et al.，1998)。然而，只鉴定出了少数与EHV毒力和免疫原特性相关的基因和基因产品。

疱疹病毒的糖蛋白，在病毒感染初期阶段，病毒粒子的细胞释放阶段，以及病毒粒子通过与相邻细胞融合而进行细胞至细胞的直接扩散阶段，都扮演了至关重要的作用。迄今为止，已经鉴定出了11种1型单纯疱疹病毒(HSV-1)编码的糖蛋白，它们命名为gB，gC，gD，gE，gG，gH，gl，gJ，gK，gL和gM。缺失了gC，gE，gG，gl，gJ，和gM的HSV-1突变体是活的，显示这些基因在培养细胞中对病毒复制是可有可无的。HSV-1和马疱疹病毒1的核苷酸序列比较显示，所有的已知HSV-1糖蛋白在EHV-1中都是保守的。按照当前的命名法，这些糖蛋白被以它们的HSV-1同源类似物的名字命名。已知EHV-1的gC，gE和gl不是在细胞培养物中生长所必需的，而gB和gD则是病毒在培养细胞中生长所必需的。其它EHV-1糖蛋白对在培养细胞中病毒复制所起的作用是未知的(Flowers，C.C.et al.，1992)。转录和蛋白分析显示，糖蛋白gB，gC，gD，gG，gH和gK可在EHV-1感染的细胞中表达。糖蛋白gM(由基因UL10表达[Baines，J.D.et al.，1991；Baines，J.D.et al.，1993])是唯一报道的非必要糖蛋白，其在所有的疱疹病毒亚家族中是保守的，并且对于人、小鼠巨细胞病毒，以及γ疱疹病毒亚科成员EHV-2，松鼠猴疱疹病毒(herpesvirus saimiri)，以及EB病毒(Epstein-Barr)有记载。与许多疱疹病毒糖蛋白类似，HSV-1 gM在病毒粒子和感染细胞的膜上出现。只缺失gM的HSV-1突变体在细胞培养系统中的生长滴度，与野生型病毒相比，大约减少了10倍，而且在小鼠模型中显示出了减少的毒力(Baines，J.D.et al.，1991；MacLean，C.A.et al.，1993)。EHV-1 gM同源类似物(gp21/22a；本文中称为EHV-1 gM)第一次是被Allen和Yeargan(Allen，G.P.et al，1987)所记载，认为其是病毒包膜的主要成分。进一步的研究显示，基因52是与HSV-1 UL10同源的基因，编码450个氨基酸的EHV-1 gM多肽(Pilling，A.et al.，1994；Telford，E.A.R.et al.，1992)。EHV-1 gM是一个多聚体疏水蛋白，包含有8个预测的跨膜区，据报道在感染细胞和纯化病毒粒子中出现，是Mr为45,000的蛋白(Pilling，A.et al.，1994；Telford，E.A.R.et al.，1992)。

为了控制EHV-1的病毒感染，可以采取两种不同的方法。第一种，开发修饰的活疫苗(MLVs)，包括广泛在欧洲和美国中使用的RacH株(Mayr，A.etal.，1968；Hubert，P.H.et al.，1996)。第二种，灭活疫苗，以及基于重组表达的病毒糖蛋白亚单位疫苗，如糖蛋白(g)B，C，D，和H，它们可对接下来在模型鼠中EHV-1的感染接种产生部分的保护作用。包含所说糖蛋白的亚单位疫苗，如gB，gC，gD，和gH，只有很弱的抗重复感染的保护作用(Awan et al.，1990，Osterrieder et al.，1995，Tewari et al.，1994，Stokes et al，1996)。