[发明专利]Bcl-w基因原位杂交试剂盒及检测方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测和疾病诊断领域，更具体地说，是涉及与消化道和其它癌症发生、转移相关基因的检测技术。

背景技术

根据国家权威机构调查，我国的癌症患者约有600万人，每年新增癌症患者160万人，死亡人数160万人，全世界癌症患者将近8400万人，每年死于癌症800万人。2020年这个数字将翻一番，这是一组恐怖的数字。科学家们和肿瘤临床工作者已对癌症诊疗做出了不懈的努力，但是癌症的死亡率非常高，主要是死于癌症的转移。去年10月5日美国卫生研究院(NIH)、癌症研究院(NCI)和其它几家单位共同完成了美国“癌症状况年度报告”，报告从1998年开始启动，历时5年多，美国财富杂志(Fortune)的专栏作家对(1975-2002)癌症的诊治也做出总结性的回顾，共同认为《人类在对抗癌症的战役中是失败者？》，这和诸多因素有关：1.肿瘤细胞异质性；2.肿瘤细胞多耐药性；3.抗癌药物设计思路不完善等。报告提出了重新审视现有诊治癌症的措施，特别是恶性肿瘤转移机理的研究支助项目太小。美国从1971年开展抗癌症大战以来(星球大战计划同步启动)，到2003美国癌症研究院和国立卫生研究院支持的癌症研究项目。不到0.5％的研究项目与癌症转移有关。2003年美国研究部门支助的癌症研究项目8900个，92％没有提及癌症转移。由于癌症是一种多基因改变的疾病，除了癌(致癌)基因和抑制癌症基因外，近年的研究发现，存在促使癌症转移的基因(metastasisGenes)和抑制癌症转移的基因(metastasis suppression Genes)。

本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另一个重要原因是，不能做到真正的早期诊断。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)或癌细胞突破血管壁时，就能做到早期预测诊断。

BCL-W基因是BCL-2家族基因之一，共有14个家族基因，与机体与细胞凋亡有关。一类是抗凋亡，另一类是致凋亡。BCL-W是抗凋亡基因。研究发现BCL-W基因在消化道癌症病人中都有很高的表达，它可以作于临床的早期消化道癌症转移、复发的诊断靶标。BCL-W基因能保护消化器官癌细胞正常生存，同时，它能使消化器官癌细胞向外转移和扩散，最终导致病人死亡。及早检测该基因的表达量和表达程度，对消化器官癌症发生过程进行动态观察，帮助和指导临床医师对BCL-W的表达，实施阻抑的治疗性方案和对癌症采取有效的治疗，有非常重要临床意义。

已往对Bcl-w基因的研究都采用高通量基因芯片技术，而这些方法多用于科研方面，不适应临床应用，特别是个性化的应用在我国现阶段没有报道。

中国专利文献CN1556221公开了“IC53基因及其相关产物诊断和治疗结肠癌的用途及一种诊断结肠癌的试剂盒”。中国专利文献CN1769485公开了“栉孔扇贝病原类立克次氏体的原位杂交检测方法及其试剂盒”。中国专利文献CN1556410公开了“一种鱼类病毒的检测试剂盒及其检测方法”。中国专利文献CN1680597公开了“一种用于定量检测丙型肝炎病毒(HCV)的荧光定量PCR试剂盒”。中国专利文献CN2918435，公开了“一种检测肥胖相关基因SNP的寡核苷酸芯片及试剂盒”。但是，关于Bcl-w基因的原位杂交检测试剂盒及其检测技术未见报道。

发明内容

为实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：