[发明专利]蛋白质的测定方法与蛋白质检测试剂盒

说明书

【技术领域】

本发明涉及食品及医学检验测定技术领域，更具体地，本发明涉及蛋 白质测定方法及其试剂盒。

【背景技术】

蛋白质主要由氨基酸组成。蛋白质平均含氮量约16％，而三聚氰胺的 含氮量约66％。目前采用的蛋白质测定方法“凯氏定氮法”是通过测定样品 中的含氮量，而不是通过直接测定蛋白质来反映蛋白质含量。由于现有食 品和饲料蛋白质含量测定方法存在的这种没有专一特异性的缺陷，使用含 氮量高的三聚氰胺来提高“虚假”蛋白质含量的成本，是使用实际蛋白原 料的1/5，于是一些人故意将三聚氰胺用作食品和饲料添加剂，抬高检测食 品和饲料中的蛋白质含量，欺骗国家质检部门和消费者。因此，需要一种 具备专一特异性的能够直接测定食品和饲料中的蛋白质含量的方法，本发 明人经过大量试验研究，终于做出了本发明。

【发明内容】

[要解决的技术问题]

本发明的目的是提供一种具备专一特异性的蛋白质的测定方法。

本发明的另一个目的是提供一种蛋白质检测试剂盒。

[技术方案]

本发明涉及一种蛋白质的测定方法，该方法利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，通过测量 还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处的吸光度变化测定蛋白 质含量。

本发明的蛋白质测定方法的基本原理如下：

这种方法应用蛋白酶(protease；proteinase；peptidase；EC 3.4家族)酶 (偶)联氨基酸脱氢酶(amino-acid dehydrogenase；EC 1.4.1.5；EC 1.4.99.1) 酶促反应比色终点法。蛋白质在蛋白酶的作用下进行酶解反应产生氨基酸， 再通过(偶)联合氨基酸脱氢酶的作用，将辅酶(在340nm处没有吸收峰) 还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，这样通过测定还原型辅酶 在340nm处吸光度上升程度就可以测定蛋白质的含量。

所述的辅酶是一种或多种选自NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺的辅酶。

所述的蛋白酶是一种或多种选自菠萝蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、 α，β，γ，δ-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、无花果蛋白酶、 激肽释放酶、金属内肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、内肽酶、N-外 肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶。

氨基酸的检测方法很多，本公司已经就使用酶法测定氨基酸的方法提 出了80多项发明专利申请，因此氨基酸的检测不仅限于使用氨基酸脱氢 酶，也可以是本公司所申请的80多项氨基酸测定方法的发明专利的任何一 种。

本发明是通过下述技术方案实现的。

本发明涉及一种蛋白质的测定方法。该蛋白质测定方法的步骤如下：

A、样品准备：

1)标准样品的制备

将一定量的纯蛋白溶于水或缓冲液中，再将蛋白浓度调整到10-100 克/升，得到的溶液作为标准样品；

2)待测样品预处理

以重量计按照1/5-1/500比将固体蛋白样品溶于水或缓冲液中作为待测 样品；含有蛋白的液体样品作为待测样品可以直接用于后续步骤；

3)空白样品

所述的水或缓冲液作为空白样品，其蛋白质浓度为0克/升；

B、试剂溶液的制备：

分别移取或称取缓冲液、稳定剂、氨基酸脱氢酶、蛋白酶、辅酶，然 后将它们混合均匀，使用时用水将它们溶解得到一种溶液，它们的浓度分 别是40-500mmol/L、0.01-7mol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、 0.2-5mmol/L；

所述的蛋白酶是一种或多种选自菠萝蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶、 α，β，γ，δ-糜蛋白酶、梭菌蛋白酶、胶原酶、弹性蛋白酶、无花果蛋白酶、 激肽释放酶、金属内肽酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、肽酶、内肽酶、N-外 肽酶、C-外肽酶、蛋白酶A、蛋白酶K、胰蛋白酶、氨基酸肽酶的蛋白酶；

所述的辅酶是一种或多种选自NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺的辅酶。