[发明专利]利用酶活性的竞争性干扰和恢复检测被分析物

权利要求书

1.一种测定溶液中被分析物浓度的方法，该方法用于非诊断目的， 其中该方法包括：

选择结合化合物；

选择被分析物的类似物，并使类似物与多核苷酸底物结合，构成利用 期望的多核苷酸反应测定分析溶液中被分析物的含量的试剂；以及其中分 析溶液中试剂与结合化合物的结合，与分析溶液中被分析物与结合化合物 的结合相竞争；

选择期望的酶用于催化期望的多核苷酸反应；

针对分析溶液中特定被分析物的浓度和预先选定的期望的酶的量，确 定结合化合物与试剂的期望比率；

形成包含一定量结合化合物和含量待测的被分析物的分析溶液；

将一定量的试剂加到分析溶液中，其中试剂的量和结合化合物的量达 到期望的结合化合物与试剂的比率；

将预先选定量的期望的酶加到分析溶液中，催化期望的多核苷酸反 应；以及

检测期望的多核苷酸反应中期望的酶的活性来确定分析溶液中被分 析物的含量；

所述期望的多核苷酸反应为循环进行的使用DNA聚合酶的核苷酸聚 合反应和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反应；

当所述期望的多核苷酸反应为循环进行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反应和λ-使用核酸外切酶的核苷酸裂解反应时，所述多核苷酸底物为 单链DNA；

当所述期望的多核苷酸反应为循环进行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反应和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反应时，分别通过使用PPi 分析和单核苷酸分析来检测释放的PPi和dNMPs，进而检测酶活性。

2.权利要求1所述的方法，其中所述结合化合物为配体结合分子。

3.权利要求1所述的方法，其中所述结合化合物为抗体。

4.权利要求1所述的方法，其中所述结合化合物为细胞受体。

5.权利要求1所述的方法，其中所述类似物包含被分析物的结构。

6.权利要求1所述的方法，其中所述类似物为具有被分析物分子结 构的化合物。

7.一种用于竞争性结合分析的试剂，其中该试剂包括：

与类似物结合的多核苷酸底物，其中选择的类似物（i）与分析溶液中 预先选定的结合化合物相结合；并且（ii）与分析溶液中被分析物与预先 选定的结合化合物的结合相竞争；而且

其中选择的多核苷酸底物参与期望的多核苷酸反应，该多核苷酸反应 被分析溶液中结合化合物与类似物的结合而抑制或终止；

所述期望的多核苷酸反应为循环进行的使用DNA聚合酶的核苷酸聚 合反应和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反应；

当所述期望的多核苷酸反应为循环进行的使用DNA聚合酶的核苷酸 聚合反应和使用λ-核酸外切酶的核苷酸裂解反应时，所述多核苷酸底物为 单链DNA。

8.权利要求7所述的试剂，其中所述结合化合物为配体结合分子。

9.权利要求7所述的试剂，其中所述结合化合物为抗体。

10.权利要求7所述的试剂，其中所述结合化合物为细胞受体。

11.权利要求7所述的试剂，其中所述类似物包含被分析物的结构。

12.权利要求7所述的试剂，其中所述类似物为具有被分析物分子结 构的化合物。