[发明专利]EMX2腺病毒载体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及癌症的基因治疗。具体地说，本发明涉及腺病毒表达载 体介导的EMX2基因表达及其在治疗癌症以及延缓癌症的复发中的应用。

背景技术

肺癌是世界上最常见的，也是致死率最高的癌症。同源盒 (Homeobox)基因介导胚胎成型，近年来被认为同成癌作用相关联[1]。 EMX2是果蝇ems基因的人类同源基因，它是一个包含同源结构域 (Homeodomain)的转录因子，在早期头部发育过程中起到重要作用。例 如，EMX2同源突变(EMX2-/-)老鼠表现出缩小的大脑半球和嗅球[2]。 EMX2的过量表达能够降低对称分裂的频率，从而EMX2通过调节对称 分裂频率影响成人神经干细胞的增殖[3]。EMX2通过调节子宫内膜细胞 增殖但不影响其分化，进而控制哺乳动物的生殖[4]。EMX2基因功能的 缺失导致发育中的哺乳动物前脑胞中Wnt1表达异常，引起皮质发育异常 [5]。然而EMX2在成癌过程中的角色并不清楚。

发明内容

发明人发现EMX2基因在肺癌中能下调Wnt癌基因，降低Wnt信号 转导通路水平并影响肿瘤细胞增殖和存活。同时发明人最新的结果表明， EMX2表达量的高低和癌症患者的预后及复发有直接的相关性：EMX2表 达高的病人的预后明显优于EMX2表达低的病人；EMX2表达高的病人 的癌症复发时间明显晚于EMX2表达低的病人。因此发明人认为利用表 达EMX2的基因治疗方法可以起到治疗癌症和延缓癌症复发的作用。

本发明一方面涉及EMX2基因，其包含序列表中序列1(SEQ ID NO： 1)所示的DNA序列，以及该序列的如下变体：

1.其编码在SEQ ID NO：1所编码的蛋白的氨基酸序列中经过取代、 缺失或添加一个或几个(优选1至6个)氨基酸且具有SEQ ID NO：1所 编码的蛋白的活性；

2.在严格条件下与SEQ ID NO：1的DNA序列杂交且具有SEQ ID NO：1的DNA的活性的DNA。其中所述严格条件例如是68°。

本发明另一方面涉及包含上述EMX2基因的载体。优选地，所述载 体是腺病毒载体。更优选地，所述载体是E1/E3缺失型的人5型腺病毒 载体。

本发明另一方面涉及包含上述载体的药物组合物。

本发明还涉及EMX2基因在制备用于治疗癌症以及延缓癌症的复发 的药物中的应用。

在优选的实施方案中，所述癌症选自肺癌、乳癌、肝癌、胃癌。在 特别优选的实施方案中，所述癌症是肺癌。

本发明还涉及治疗癌症以及延缓癌症的复发的方法，包括给病人施 用包含EMX2基因的载体。

附图说明

图1显示基因治疗表达载体。

图2显示EMX2腺病毒对Wnt癌基因的表达量的影响。

图3显示EMX2腺病毒对Wnt信号通路活性的影响。

图4显示EMX2腺病毒对肺癌细胞A549生长速率的影响。

图5显示EMX2腺病毒对肺癌细胞H1299生长速率的影响。

图6显示EMX2腺病毒对肺癌细胞H322生长速率的影响。

图7显示EMX2腺病毒对肺癌细胞A427生长速率的影响。

图8显示EMX2腺病毒影响肺癌细胞存活率的影响。

具体实施方式

实验材料和方法

基因治疗表达载体构建：

将EMX2基因序列(见序列表SEQ ID NO.1中的ORF序列)插入 人源腺病毒Type 5(DE1/E3)表达载体。此腺病毒表达载体利用CMV启 动子表达EMX2基因。具体地说，将pCMV6-XL5EMX2载体中EMX2 的cDNA序列插入中转载体(pDNR-CMV)，经限制性内切酶鉴定正确 后，将基因表达部分转移至腺病毒基因组载体，线性化之后转入HEK 293 细胞，约2-3周后，腺病毒量增加，浓缩后通过空斑形成实验精确确定活 性腺病毒含量。腺病毒类型为E1/E3缺失型的人5型腺病毒。载体简图 如图1所示。

RT-PCR：