[发明专利]一种从鱼油中富集n－3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法

权利要求书

1.一种从鱼油中富集n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法，其特征是以精制鱼油为原料，先采用化学水解法水解鱼油获得n-3多不饱和脂肪酸，然后通过色谱层析方法从n-3多不饱和脂肪酸混合液中分离纯化制备二十碳五烯酸EPA和二十二碳六烯酸DHA，最后以甘油和纯化的EPA，及甘油和纯化的DHA为底物，用脂肪酶分别催化合成EPA甘油酯及DHA甘油酯产品，步骤为：

(1)鱼油的化学水解

准确称取精制鱼油样品10g，加入2mol/L NaOH乙醇水溶液150mL，乙醇∶水体积比为6∶1，充氮保护，在50℃条件下皂化60min，加入正己烷100mL萃取未皂化物两次，水化层用100mL 3mol/L的HCl酸化，然后用正己烷100mL×3萃取水解出来的游离n-3多不饱和脂肪酸，水洗至中性，过无水Na₂SO₄，N₂吹干溶剂得到油状的n-3多不饱和脂肪酸；

(2)EPA及DHA的分离纯化

将鱼油水解后得到的含EPA和DHA的n-3多不饱和脂肪酸混合液2g上C18柱进行层析分离，流动相为甲醇/水，70％～100％甲醇梯度洗脱，洗脱液进行分部收集，采用质谱对层析样品进行快速分析，并利用HPLC检测收集液的EPA纯度、及DHA纯度，经反复层析分离后制得纯化的EPA产品、及DHA产品，其EPA纯度为93％，DHA纯度为94％；

(3)脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯

以甘油和制备得到的EPA、及甘油和DHA为底物，有机相脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯：在反应容器中加入正己烷6mL，甘油0.05g，EPA或DHA 0.5g，脂肪酶Novozym 435添加量为0.1g，充氮保护，在40℃条下150rpm振荡水浴进行酯化反应，反应24h后添加0.5g分子筛除去反应生成的水份，反应48h后得到合成产物EPA甘油酯或DHA甘油酯；EPA甘油酯的酯化率为95％，DHA甘油酯的酯化率为94.5％。

2.一种从鱼油中富集n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的方法，其特征是步骤为：

(1)鱼油的化学水解

准确称取精制鱼油样品10g，加入2mol/L NaOH乙醇水溶液150mL，乙醇∶水体积比为9∶1，充氮保护，在60℃条件下皂化90min，加入正己烷100mL萃取未皂化物两次，水化层用100mL 3mol/L的HCl酸化，然后用正己烷100mL×3萃取水解出来的游离n-3多不饱和脂肪酸，水洗至中性，过无水Na₂SO₄，N₂吹干溶剂得到油状的n-3多不饱和脂肪酸；

(2)EPA及DHA的分离纯化

将鱼油水解后得到的含EPA和DHA的n-3多不饱和脂肪酸混合液2g上C18柱进行层析分离，流动相为甲醇/水，70％～100％甲醇梯度洗脱，洗脱液进行分部收集，采用质谱对层析样品进行快速分析，并利用HPLC检测收集液的EPA纯度、及DHA纯度，经反复层析分离后制得纯化的EPA产品、及DHA产品，其EPA纯度为94％，DHA纯度为95％；

(3)脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯

以甘油和制备得到的EPA、及甘油和DHA为底物，有机相脂肪酶催化合成EPA甘油酯、及DHA甘油酯：在反应容器中加入正己烷10mL，甘油0.05g，EPA或DHA 0.7g，脂肪酶Novozym 435添加量为0.2g，充氮保护，在50℃条下150rpm振荡水浴进行酯化反应，反应12h后添加1.0g分子筛除去反应生成的水份，反应48h后得到合成产物EPA甘油酯或DHA甘油酯；EPA甘油酯的酯化率为96％，DHA甘油酯的酯化率为95％。