[发明专利]一株产菊糖果糖转移酶的菌株和用该酶生产双果糖酐Ⅲ的方法

权利要求书

1.一株产菊糖果糖转移酶的菌株，其分类命名为金黄节杆菌(Arthrobacteraurescens)SK 8.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No.：M 208120。

2.用权利要求1所述的微生物金黄节杆菌SK 8.001，发酵生产菊糖果糖转移酶的方法，其特征在于步骤为：

(1)种子培养

种子培养基：蛋白胨1-10g/L，NaCl 1-10g/L，牛肉膏1-5g/L，pH7.0，去离子水配制；

将金黄节杆菌SK 8.001于25-30℃、100-250rpm的振荡速度下在种子培养基中培养10-16h来活化该微生物；

(2)发酵培养

发酵培养基：菊糖3-30g/L，硝酸钠1-20g/L，氯化钾0.5-2g/L，磷酸二氢钾0.5-2g/L，硫酸镁0.5-3g/L，pH 6.5-8.0；

在25-30℃、搅拌速度为200-500rpm、空气流量为5-30m³/(L·h)的条件下在发酵培养基中发酵48-96h生产菊糖果糖转移酶；

(3)发酵后处理

通过离心法除去发酵液中的菌体，得到菊糖果糖转移酶粗酶液；

或菊糖果糖转移酶粗酶液进一步超滤浓缩，用3倍浓缩液体积的工业酒精沉淀蛋白质，离心和冷冻干燥得到菊糖果糖转移酶粗酶粉。

3.用权利要求2所述方法制备的菊糖果糖转移酶转化菊糖生产双果糖酐III的方法，其特征是：

向质量浓度1％-50％菊糖溶液中添加菊糖果糖转移酶催化转化，转化反应条件为：底物菊糖浓度范围为1％-50％，酶对底物的用量为0.01-10U/g，pH 5.5，转化反应温度为40-50℃，转化反应时间3-24h，得到含有双果糖酐III的酶反应液，用于制备双果糖酐III糖浆、双果糖酐III粉末或双果糖酐III晶体；

酶活力U定义为在温度55℃，pH5.5条件下1分钟产生1.0μmol双果糖酐III所需的酶量为1个酶活力单位。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是双果糖酐III糖浆的制备方法，步骤为：

(1)脱色

在含有双果糖酐III的酶反应液中添加活性炭，添加量为酶反应液的0.2％-2.0％，在80℃下温育30min，然后进行硅藻土过滤，取脱色液；

(2)浓缩

将脱色液真空蒸发浓缩至固形物含量为60％-95％，即得双果糖酐III糖浆。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是双果糖酐III粉末的制备方法，步骤为：

(1)脱色

同权利要求4所述脱色步骤；

(2)浓缩

将脱色液真空蒸发浓缩至固形物含量为20％-40％的浓缩液；

(3)喷雾干燥

将麦芽糊精与以固形物含量干基计的双果糖酐III浓缩液按照重量比1∶1-1∶5的比例混合，控制进风温度170-180℃、出风温度为70-80℃，喷雾干燥，得到含麦芽糊精的双果糖酐III粉末。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是双果糖酐III晶体的制备方法，步骤为：

(1)脱色

同权利要求4所述脱色步骤；

(2)结晶

将脱色液浓缩至固形物含量为60％-95％，快速降温至50℃，缓慢均匀添加双果糖酐III晶种，向浓缩液中缓慢加入0.2-2倍浓缩液体积的乙醇，通过12h的缓慢降温过程温度降至10℃，得含双果糖酐III晶体的糖膏，用乙醇清洗去除晶体表面的杂质，离心分离，真空干燥至恒重，得双果糖酐III晶体。