[发明专利]γ射线联合phTERT－HRP/IAA在治疗喉癌药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体涉及γ射线在增强端粒酶逆转录酶基因(hTERT)启动子介导的基因治疗药物中的应用，γ射线在增强hTERT启动子活性、增强下游基因表达中的作用。同时还涉及γ射线与hTERT启动子调控辣根过氧化物酶(HRP)/吲哚乙酸(IAA)系统产生协同作用破坏喉癌细胞和抑制喉癌细胞生长制剂中的应用。

背景技术

纵观国内外的疾病谱变化模式，恶性肿瘤已成为严重威胁人类健康的重大疾病。随着分子生物学的进步，基因治疗为战胜肿瘤带来了希望。各国在恶性肿瘤基因治疗方面开展了大量研究并取得了一定成果，部分基因治疗方案已经用于临床，从安全性考虑，可以说适于肿瘤治疗。例如，中国拥有自主知识产权的重组人p53腺病毒注射液已获得国家食品药品监督管理局批准的新药证书，用于治疗头颈部癌症和胃癌等恶性肿瘤。

基因治疗的关键是靶向性问题，也就是把治疗效应限定在特定的靶细胞、靶组织或靶器官内，既达到治疗作用又不影响正常细胞和组织。外源调控在基因治疗中尤为重要。为了能特异而有效地杀伤肿瘤细胞，需要建立一种特异性高、活性强的启动子，来控制下游目的基因的表达。

通过肿瘤特异性启动子调控目的基因的表达被广泛地运用于肿瘤靶向基因治疗的研究中，这种方法遇到的困难在于，1.绝大多数选择性启动子只针对特殊的组织来源，而没有能够适用于不同组织来源的启动子；2.绝大多数选择性启动子启动效力较弱，很难达到治疗水平的转基因表达。到目前为止，几乎没有既有高特异性，又有高活性的肿瘤特异性启动子，这直接阻碍了基因治疗的发展。hTERT基因启动子已被大多数学者公认为是针对恶性肿瘤普遍性最好的启动子，是最有希望应用于肿瘤靶向基因治疗的启动子。提高基因治疗中hTERT启动子活性，将有助于下游治疗基因的表达、提高疗效，这一点我们在治疗过程中应当重点考虑。

端粒酶是一种核糖核蛋白复合物，能够维持染色体末端的端粒长度。端粒酶在超过85％的人类恶性肿瘤细胞中具有高活性，而在正常组织(除生殖细胞和有高度复制潜能的体细胞)中被抑制或不表达(见参考文献：Shay JW，BacchettiS.A survey of telomerase activity in human cancer.Eur J Cancer，1997，33：787-791)。细胞中端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达是端粒酶活性的主要决定因素，它在大部分肿瘤细胞中高表达(见参考文献：Cong YS，Wright WE，ShayJW.Human telomerase and its regulation.Microbiol Mol Biol Rev，2002，66：407-425)。hTERT基因启动子作为肿瘤特异性启动子被运用到多种肿瘤的靶向基因治疗方案中，但其活性较弱，下游基因表达产物往往难以实现理想的效果(见参考文献：Gu J and Fang B：Telomerase promoter-driven cancer genetherapy.Cancer Biol Ther，2003，2：S64-S70)。如果能够增强hTERT基因启动子的活性，必将推动肿瘤靶向治疗的进步，具有重要的理论和临床意义。部分人尝试通过添加顺式作用元件c-Myc结合位点、Spl结合位点等(见专利文献：W0/2004/076668)，来修饰端粒酶逆转录酶基因启动子，增强启动子活性。由于启动子的活性调节机制尚不明确，添加的这些反应元件在细胞内广泛存在，受多种因素调节，所以，特异性和强度都有待检验。

放射治疗是用放射治疗设备如X线治疗机、⁶⁰钴治疗机和加速器产生的X射线、γ射线和电子束等来照射肿瘤，使增殖的肿瘤细胞的DNA链损伤，进而丧失增殖能力，引起细胞死亡。γ射线本质上同X射线一样，是一种光子流，不带电，以光速运动，具有很强的穿透力，通过直接和间接作用造成DNA损伤杀灭肿瘤细胞。因此，γ射线本质上同X射线被用于大部分肿瘤的放射治疗。

目前为止，国外的3家实验室在研究中用到了射线和hTERT启动子介导的基因治疗，取得了理想的治疗效果。