[发明专利]三聚氰胺免疫层析试纸检测方法

说明书

技术领域

属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是一种三聚氰胺试纸检测方法。

背景技术

三聚氰胺(英文名Melamine)，简称三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺、2，4，6-三氨基脲、蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，是重要的氮杂环有机化工原料。三聚氰胺分子式C₃N₆H₆、C₃N₃(NH₂)₃，分子量126.12。

在食品的生产和销售过程中，需要测定食品的蛋白质含量，而直接测量蛋白质技术上比较复杂，所以通常采用凯氏定氮法测定蛋白质含量，即通过测定食品中氮的含量来间接推算蛋白质的含量。由于三聚氰胺与蛋白质相比含有更多的氮原子，所以添加在食品中的三聚氰胺可以造成食品蛋白质含量较高的假象，因而被不法商贩所利用。三聚氰胺被摄入人体后，通过小肠吸收进入血液循环并最终进入肾脏，形成肾结石，尤其对于哺乳期的婴儿，更容易造成结石。

目前主要采用仪器检测的方法检测三聚氰胺。主要方法有：GC-MS法、Spectra-Quad在线检测、超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法、反相高效液相色谱法、高效液相色谱-二极管阵列法、高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-四极杆质谱联用、固相萃取与高效液相色谱联用、液相色谱串联质谱法(LC-MSMS)等。这些仪器方法价格昂贵，且方法操作复杂，需受过专门训练的人员才能操作，而且存在着适用范围窄、设备昂贵、成本高等问题。目前本技术领域还没有一种特异性强、灵敏度高、且操作简单方便、适宜快速的现场检测和大规模普查的要求的乳制品中三聚氰胺检测方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强、灵敏度高、且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的三聚氰胺快速试纸半定量检测方法。

本发明的目的可通过以下技术方案来实现。

三聚氰胺免疫层析试纸检测方法其技术要点是：试纸的被衬上依次贴有样液吸收部分和胶体金标记部分和检测反应部分和吸水部分，胶体金标记部分被标记的物质为第二种属动物蛋白与三聚氰胺检测用抗原的混合物或第二种属动物蛋白与三聚氰胺抗体的混合物；检测反应部分上面包被有三聚氰胺抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参考线或包被有三聚氰胺检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG 1条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。

所述的检测用抗原是指三聚氰胺与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指三聚氰胺与载体物质匙孔血蓝蛋白(KLH)形成的偶合物。

所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。

所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、猪或其他非兔源性动物蛋白。

本发明所描述的试纸的各部分处理与功能如下：

被衬：为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样液吸收部分制备：将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH7.0-8.4的PBS中2min，取出，80℃烘干或其他方式干燥，即作为样液吸收部分，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动。

胶体金标记部分的制备：该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用。制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记三聚氰胺抗原或三聚氰胺抗体、胶体金标记部分处理。

(1)胶体金溶液的制备：将氯金酸(HauCl₄)用超纯水配制成1％的母液，取1mL的母液，用超纯水定容至100mL，配成0.01％的溶液，加热至沸腾，加入1-5mL1％的柠檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。