[发明专利]一种儿童白血病基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感基因检测技术，具体的说，涉及一种有关儿童白血病基因检测的试剂盒。

背景技术

白血病为小儿常见的血液系统的恶性肿瘤。是一种由于造血干细胞增殖分化异常而引起的恶性增殖性疾病，它不仅影响骨髓及整个造血系统，并浸入身体其他器官。据统计，15岁以下儿童白血病的发病率为3/10万～4/10万。小儿白血病居小儿各种恶性肿瘤的首位，任何年龄都可发病，其中以学龄前期和学龄期儿童多见。根据发病的急缓、临床、血液及骨髓表现等，一般分为急性与慢性。其中，以急性白血病为主，占小儿白血病总数的97％。急性白血病又可分为急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白血病。前者占70-85％。

白血病的临床表现是由正常血细胞减少和白血病细胞浸润某些器官和组织所引起的。病人常常因发烧、脸色发白、虚汗、皮肤紫斑和疼痛等症状去看病。发病可能很隐蔽，也可能很突然，症状可轻可重。大多数在确诊之前有数天病史，少数可达数周至数月。极个别的病例表现为爆发性的高热、虚弱、贫血、不定位的或定位的疼痛及大片淤斑，进展极快。

当家庭中有一个成员发生白血病时，其近亲发生白血病的机率会比一般人高4倍。单卵双胞胎中如果一个患急性白血病，另一个发生率为20％～25％。以上事实均提示白血病的病因可能与遗传有关。近年研究证实，染色体数量的增加或减少等数目异常，以及易位、倒置、缺失等结构异常，使基因的结构、表达异常。基因表达或基因的失活是细胞恶变的基础之一。

儿童白血病具有两个特点：一是恶性程度高，病情发展迅速、大多是急性；二是对化学药物治疗很敏感，癌细胞容易杀灭。一般1到5岁的孩子最容易得的是急性淋巴细胞白血病，这一年龄段患者经治疗后效果最好。一般在9岁以前都能较好治愈，而14岁以后就和成人一样较难治愈。因此，幼儿期的白血病如能及时发现，采用适当的治疗手段，往往都能取得满意疗效。

人们希望有一种简便而客观的方法可以进行儿童白血病基因检测，做到早发现、早诊断，提早采取预防措施，尽量避免悲剧的发生。

发明内容

为了可以简便而客观地对儿童白血病进行测试，本发明提供一种儿童白血病基因检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童白血病的基因进行检测，从而为预防儿童白血病，提供重要的参考信息。

该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童的DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。

所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及儿童白血病相关的GSTP1和XRCC1基因突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列分别如下：

扩增GSTP1基因的引物序列如下：

上游引物F1A(C) 5-GAC CTC CGC TGC AAA TCC A-3  19bp，

上游引物F1G(C) 5-AC CTC CGC TGC AAA TCC G-3   18bp，

下游引物R1     5-GCA CTG GGG GCT GAA CAAA-3   19bp；

扩增XRCC1基因的引物序列如下：

上游引物F2A(C) 5-GCA CAC TCC GGA ATG GCGA-3  19bp，

上游引物F2G(C) 5-GCA CAC TCC GGA ATG GCG G-3 19bp，

下游引物R2     5-CCT CCG GCG TAG CAC GCA-3   18bp。

上述的儿童白血病基因检测试剂盒，所述的阳性对照品有4个，分别包含如下的序列：

SEQ1：

GGACCAGCAG GAGGCAGCCC TGGTGGACAT GGTGAATGAC

GGCGTGGAGG ACCTCCGCTG CAAATACATC TCCCTCATCT

ACACCAACTA TGTGAGCATC TGCACCAGGG TTGGGCACTG

GGGGCTGAAC AAAGAAAGGG GCTTCTTGTG CCCTCACCCC

CCTTACCCCT CAGGTGGCTT GGGCTGACCC CTTCTTGGG；

SEQ2：

GGACCAGCAG GAGGCAGCCC TGGTGGACAT GGTGAATGAC