[发明专利]一种儿童药物性耳聋易感基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种疾病易感检测产品，具体的说，涉及一种有关儿童药物性耳聋易感基因检测试剂盒。

背景技术

药物性耳聋被破坏的不是外耳和中耳的声音传导系统(不是传导性聋)，而是感知声音最重要又最脆弱的部位耳蜗毛细胞遭致药毒损害。毛细胞是听觉神经的末梢感受器，正常情况下毛细胞把声能转化成生物电冲动传给听觉神经输入大脑中枢，人才能听到外界的各种声音。耳毒性药物专门伤害毛细胞，让人感受不到外界的声音。这种聋属于“感音神经性聋”，难以治愈。

婴幼儿聋不易识别。

药物性耳聋不疼不痒，外耳道既不红肿也不流脓，孩子不哭不闹，反而变得安静。它具有很大的隐蔽性，孩子都变哑了，家长还不知是耳聋引起的。儿童药源性耳聋常为双侧性、永久性损害。特别是幼儿，由于不会诉说或表达不准确，待家长发现时，语言发育已经受损害，不仅致聋而且致哑，贻误了治疗时机。调查显示：在我国众多的耳聋患者中，因药物毒性作用致聋者约占一半左右。

小心致聋的药物。

目前医学上发现的能引起耳聋的药物有60多种。过去知道的主要有链霉素、卡那霉素、庆大霉素等，近年来发现还有一些药物也具有耳毒性，抗生素类还有丁胺卡那、新霉素、小诺霉素、红霉素、氯霉素、四环素、多粘菌素、万古霉素、利福平；其他类药物有：保泰松、阿斯匹林、消炎痛、灭滴灵、心得安、苯巴比妥、乙胺碘呋酮等。

造成耳聋不仅与药量有关。

上海医大曾对4年间用过庆大霉素的175例6个月至8岁的儿童进行电测听检查，发现都有不同程度的听力损害，严重耳聋121例，2岁以前的损害尤其严重。损害程度与用药总量、给药途径和疗程长短有密切关系。椎管内给药的危害性最大，其次为静脉给药、肌肉给药和皮肤损伤后表面给药，口服相对安全。两种或多种耳毒性药物联合应用时，发生损害的几率增高。

母亲受害可遗传后代。

临床观察发现，有些药物能从母亲的乳汁中分泌出来，损伤婴儿听神经，引起耳聋。还有的药物可通过胎盘进入胎儿体内，引起先天性耳聋。近年更进一步发现，有药物性耳聋家族史的人，对耳毒性药物特别敏感，病人有家族聚集性特点。例如一位病人，仅注射0.5克链霉素，很快听力急速下降，出现耳聋，经追访探明，他家祖孙三代竟有17人因注射该药而致聋。研究探明，药物性耳聋系由细胞线粒体的遗传基因发生变异引起的，即家族的变异基因可能通过母亲遗传给她的子孙，使之具有潜在的过敏性，此称“母系遗传”。家族史可看作是药毒性耳聋的危险因素之一。

由此可见，在对婴幼儿，尤其是有家族遗传史的婴幼儿，特别有必要在用药，尤其是用一些抗生素之前，获知其是否有药物性耳聋的易感基因的信息。但目前还没有相应的检测方法应用。

发明内容

本发明提供一种儿童药物性耳聋易感基因分析检测试剂盒，可以以儿童DNA样本为测试样本，对儿童药物性耳聋易感基因进行检测，从而判断其是否有导致药物性耳聋的基因突变存在，从而有助于临床用药的参考，减少药物性耳聋的发生率。

该试剂盒由DNA抽提试剂，预混PCR反应液，标准阳性对照品，标准阴性对照品组成。使用时以被测儿童遗传自母亲的线粒体DNA Mito DNA样本为检测对象，经过样本DNA抽提后，使用试剂盒在荧光定量PCR仪上进行反应，结合反应结果进行诊断。

所述的预混PCR反应液含有SYBR green I，以及儿童药物性耳聋易感基因突变位点的扩增引物。以及与儿童药物性耳聋相关的线粒体DNA Mito基因(MT-DNA)突变位点的扩增引物；扩增引物为包含突变位点的上游引物和正常的下游引物，序列如下：

上游引物FA 5-ACCCCTACGCATTTATATAGAGGTGA-3  26bp，

上游引物FG 5-CCCCTACGCATTTATATAGAGGTGG-3   25bp，

下游引物R  5-AAGTGTAAGTTGGGTGCTTTGTGTT-3   25bp。

所述的阳性对照品有2个，分别包含如下的序列：

SEQ1：

AACTAAAACC CCTACGCATT TATATAGAGG AGACAAGTCG TAACATGGTA

AGTGTACTGG AAAGTGCACT TGGACGAACC AGAGTGTAGC TTAACACAAA

GCACCCAACT TACACTTAGG AGATTTCAAC TTAACTTGAC CGCTCTGAGC