[发明专利]一种红细胞的冻干保护剂及其在冻干过程中的使用方法

权利要求书

1.一种红细胞的冻干保护剂，包括冻干前保护剂及冻干后的复水保护剂，其特征在于：

冻干前保护剂有下列成分组成：

24mM的葡萄糖溶液、0.43mM的腺嘌呤、33mM的NaCl、8.9mM的甘露醇、6.6mM的KCl、10％～15％的高分子羟乙基淀粉、2.5％的牛血清白蛋白、3％的柠檬酸钠；

冻干后的复水保护剂有下列组分组成：

141mM海藻糖、5mM抗坏血酸、38.5mM NaCl、0.265mM KH₂PO₄、1.4mMNa₂HPO₄、11.25％～12.5％的葡聚糖、1.9％的牛血清白蛋白、90mM KCl、100mM肌苷、5mM腺嘌呤；

以上所用的溶剂均为双蒸水。

2.如权利要求1所述的一种红细胞的冻干保护剂，其特征在于所述的冻干保护剂在红细胞的冻干过程中使用方法如下：

(1)细胞的前处理：

将血液以2500r/min离心5min，弃去血浆及白膜，将红细胞用等渗pH＝7.4的磷酸盐缓冲溶液以2500r/min离心5min，反复洗涤3次，弃去上清液，得红细胞；

将得到的洗涤红细胞与800mM的海藻糖溶液以1:1.5的比例混合均匀，通过电脉冲的方法将海藻糖载入细胞内，使其胞内海藻糖浓度达到60mM左右，得载入海藻糖的红细胞浓缩液；

(2)红细胞的冻干处理：

将得到负载海藻糖的红细胞浓缩液和冻干前的保护剂按照一定的体积比1：4混合，使细胞的压积为5％左右；

将经冻干前保护剂处理的红细胞在4℃冰箱中预冷15分钟左右，再按照10℃/分钟的降温速率迅速降到-70℃，并在此温度下保持2小时以上使冻干物冻结；

开始抽真空，一次干燥，并使隔板温度和压力分别保持在-45℃和1～3帕左右，时间为15小时；再二次干燥，过程中设定隔板温度为15℃，压力1～3帕左右，持续时间为10小时，得冻干的红细胞；

(3)冻干的红细胞复水处理：

将复水保护剂体积和冻干前负载海藻糖的红细胞浓缩液体积的比为2:1进行复水。

3.如权利要求2所述的一种红细胞的冻干保护剂，其特征在于所述的冻干保护剂在红细胞的冻干过程中使用方法中，细胞的前处理中电脉冲参数为电压300V、脉宽1ms、频率4～6次/min。