[发明专利]番红花病毒检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术，具体涉及番红花病毒检测方法。

背景技术

番红花(Crocus sativus L.)又名藏红花、西红花，系鸢尾科(Iridaceae)番红花属多年生草本植物。原产南欧各国及伊朗等地，后经印度转入西藏再传入中国，引种栽培成功，故又名藏红花或西红花。由于番红花只是柱头入药，产量极低，采收耗时费力；同时种源少，适宜栽培地区有限、条件苛刻等因素致使其价格昂贵，在我国被列为珍惜名贵的中药材，并被誉为“植物黄金”。其雌蕊柱头是名贵中药，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神之功效，是传统的妇科、伤科良药。临床上还主要用于胃病、调经、麻疹、发热、肝脾肿大等的治疗。尤其是近年来在治疗心脑血管疾病方面取得了较好的疗效。

中国藏红花的栽培品种主要来自于德国和日本，在田间种植2～3年后均严重退化，叶片出现黄色条斑，整株矮化、黄化，顶端枯死，提前倒苗，球茎畸小，柱头产量大大降低。国内外报道其病源为芜菁花叶病毒(turnip mosaic virus，TuMV)、鸢尾花叶病毒(iris mosaic virus，IMV)、菜豆黄花叶病毒(beam yellow mosaic virus，ByMV)、黄瓜花叶病毒(cu2cumber mosaic virus，CMV)及烟草脆裂病毒(tobaccorattle virus，TRV)，其中TuMV、IMV和ByMV属于马铃薯Y病毒(potyvirus)。经田间调查和病毒学鉴定，导致藏红花花品质衰退、产量递减的植物病源是TuMV，这种病毒对藏红花的危害巨大，发生面积大，田间发病率为70％～97％。因而检测和发现番红花病毒很重要，但现有检测方法不太方便，例如：指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术和总核酸提取法等，有一定局限性。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供一种快速、灵敏、特异的检测番红花病毒的方法。

本发明提供了一种番红花病毒检测方法，根据番红花易感CMV(黄瓜花叶病毒)，TuMV(芜菁花叶病毒)，PVY(马铃薯Y病毒)，TRV(烟草脆裂病毒)病毒核苷酸序列设计的特异性引物，提取植物组织的总RNA后，采用RT-PCR的方法，检测番红花病毒。该方法包括下列步骤：

1、引物设计

根据番红花病毒的核苷酸序列设计了扩增番红花病毒外壳蛋白的特异性引物。根据已报道的病毒的CMV、PVY、TuMV、TRV核苷酸序列设计了扩增病毒的特异性引物，引物序列如下：

表1番红花病毒检测用引物