[发明专利]番红花的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物的组织培养及繁殖方法，具体涉及番红花的组织培养快速 繁殖方法。

背景技术

番红花(Crocus sativus L)又名藏红花、西红花，系鸢尾科(Iridaceae)番红花 属多年生草本植物。原产南欧各国及伊朗等地，后经印度转入西藏再传入中国， 引种栽培成功，故又名藏红花或西红花。由于番红花只是柱头入药，产量极低， 采收耗时费力；同时种源少，适宜栽培地区有限、条件苛刻等因素致使其价格昂 贵，在被列为珍稀名贵中药材，并被誉为“植物黄金”。番红花的雌蕊柱头是名 贵中药，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神之功效，是传统的妇科、伤科良药。 临床上还主要用于胃病、调经、麻疹、发热、肝脾肿大等的治疗。尤其是近年来 在治疗心脑血管疾病方面取得了较好的疗效。

由于番红花不能进行有性生殖，只能通过球茎进行无性繁殖，且栽培条件下 其球茎退化现象严重，导致种质资源严重缺乏。中国自引种以来，栽培番红花产 量一直较低，远远不能满足人们的需要。近年来组织培养技术在药用植物上得到 了广泛的应用，这为繁殖能力较差的名贵中药药用资源的保存和生产提供了新的 途径。利用生物技术、组织培养的方法进行种苗生产，在很多植物上已成为工厂 化的商品生产，并带来了丰厚的经济效益。

因此，采用组织培养的方法，进行番红花愈伤组织诱导、丛生芽的诱导以及 球茎的再生，是探索快速、大量、持续地获得有效新生球茎的途径。利用组织培 养的方法建立优系番红花的繁殖体系，进行种苗的工厂化育苗生产，具有快速大 量繁殖优系品种的优势，可以解决番红花的种质资源质量问题。为了探索扩大种 源的途径，采用组织培养技术进行了番红花愈伤组织及小球茎诱导进行研究，以 期为其种质资源的保存与利用奠定一定的基础。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，研究建立番红花无菌快繁体系，并提高增 殖率，适宜大规模生产优质种苗。

本发明提供一种番红花组织培养快速繁殖方法。

本发明利用组织培养的方法，进行了番红花愈伤组织及小球茎诱导，建立优 系番红花的繁殖体系，进行种苗的工厂化育苗生产，快速大量繁殖优系品种。

本发明所述方法包括下列步骤：

(1)外植体灭菌：将球茎用水洗净，除去皮膜，置于超净工作台上消毒接种； 先于70％酒精中漂洗30-40秒，再用0.1％HgCl₂消毒8-10分钟，最后用无菌水 冲洗4～5次，彻底洗去残余的HgCl₂，将消毒后的球茎切成1—1.5cm³，接种于 培养基上；

(2)愈伤组织诱导：将经过消毒灭菌后的上述球茎在无菌环境中接种于诱导培 养基MS+0.5mg/L NAA+5.0mg/L6-BA培养基上中，培养20天收获愈伤组织；

(3)丛生芽诱导培养：将愈伤组织接种到MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L6-BA培 养基上，20天后在黑暗条件(24h无光照)下，20℃培养，可诱导出大量丛生芽；

(4)不定芽继代培养：将丛生芽切割成单个芽后转接到MS+0.5mg/L NAA+2.0mg/L6-BA培养基上，在黑暗条件下，20±2℃培养，15天后芽长到 2-3cm；

(5)球茎诱导培养：当芽高2-3cm时转接到MS+0.5mg/L NAA+3.0mg/L6-BA 培养基，在光照条件(光照时间12h/d，光照强度1500～20001x)下诱导出球茎。 本发明方法所述培养基MS、NAA和6-BA均可从市售得到。

本发明方法基于下列试验研究，其结果如下：

(一)方法：

(1)外植体灭菌：将球茎用水洗净，除去皮膜，置于超净工作台上消毒接种； 先于70％酒精中漂洗30-40秒，再用0.1％HgCl₂消毒8-10分钟，最后用无菌水 冲洗4～5次，彻底洗去残余的HgCl₂，将消毒后的球茎切成1—1.5cm³，接种于 培养基上；