[发明专利]一种用电化学活性开关分子信标检测核酸的方法

权利要求书

1.一种用电化学活性开关分子信标检测核酸的方法，其特征在于，具体操 作步骤：

第一步  电化学活性开关分子信标的合成

每1.0OD核酸量合成时取30μL 3.3×10^-3molL^-1的胭脂红酸溶液和加入20mg 咪唑，调节该溶液的pH值至6.5，室温下羧基活化30分钟，在偶联剂12mgEDC 和27mgNHS存在下，加入含1.0OD两端修饰有氨基的具有茎环结构特定序列 核酸的PBS溶液，调节该PBS溶液的pH值至7.3和溶液体积为400μL，在冰水 浴下搅拌24小时，透析袋于PBS溶液中透析48小时，去除未与核酸偶联的胭 脂红酸，用HPLC方法提纯，得到浓度不低于1×10^-5molL^-1的电化学活性开关分 子信标，4℃冰箱中保存备用；

第二步  检测样品中特定序列的核酸分子

在含有待测的特定序列核酸溶液的样品中，加入50μL 1×10^-5molL^-1的第 一步得到的电化学活性开关分子信标，控制溶液的杂交条件为PBS溶液的pH＝ 7.3和[Na⁺]＝1.8mol/L，50℃下杂交反应30分钟，采用羧基化碳纳米管修饰电 极在0.2～0.9V范围扫DPV，记录0.7V处的氧化峰电流值，该氧化峰电流值与 样品中特定序列核酸浓度呈线性关系。