[发明专利]一种大鼠可诱导多能干细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种大鼠可诱导多能干细胞iPS的制备方法，其特征在于，包括步骤：

A)构建携带转录因子的慢病毒载体，所述转录因子选自：Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4，Lin28、Nanog；

B)将步骤A)所得慢病毒载体以组合形式感染大鼠成体细胞，挑选形态类似胚胎干细胞的克隆传代培养，通过筛选符合胚胎干细胞特性的细胞克隆，得到大鼠iPS细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大鼠成体细胞包括大鼠原代骨髓细胞或原代耳尖成纤维细胞。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述慢病毒载体以组合形式携带的转录因子包括：Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B)的传代培养是将大鼠iPS克隆按1∶3～50的比例传至辐照过的小鼠胚胎成纤维细胞上。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤B)的筛选是筛选碱性磷酸酶染色呈阳性的细胞。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤C)大鼠iPS细胞的干细胞多能性鉴定。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤C)大鼠iPS细胞的干细胞多能性鉴定包括：

D)碱性磷酸酶表达呈阳性；

E)干细胞表面特异标记SSEA-1(+)、Nanog(+)；

F)自然分化形成胚状体后，外胚层NCAM(+)、PAX6(+)，中胚层SM22-a(+)、Myod(+)和内胚层Sox17(+)、AFP(+)；

G)大鼠iPS细胞注射先天性免疫缺陷小鼠后形成畸胎瘤。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤G)形成的畸胎瘤具有外胚层、中胚层和内胚层。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述大鼠iPS细胞的干细胞多能性鉴定还包括：

H)Oct4基因的启动子区域被去甲基化；

I)端粒酶活性比大鼠成体细胞高。

10.一种按权利要求1～9所述任一项制备的大鼠可诱导多能干细胞。