[发明专利]一种免疫唤醒微系统及其制备方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种包括细胞和免疫微粒体的免 疫唤醒微系统及其制备方法和应用。

【背景技术】

骨髓移植(BMT)可以产生强大的移植物抗癌反应(GVT)，是目前唯一 能治愈血液癌症和其他实体瘤的方法。BMT的应用巳有三十多年历史，但是 抗癌机理长期以来并不清楚。BMT治疗癌症的方法，首先是用高剂量的放射 线和化学药物破坏病人的骨髓免疫系统，然后通过骨髓配型，移植供体的骨髓。 目前已知，这种BMT“重建免疫系统”的方法，实质上是一种极为有效的抗 癌免疫反应，GVT能持续地清除癌细胞，直至最后一个癌细胞消失。

但是，BMT也存在着严重的副作用，称为移植物抗宿主反应(GVH)。供体 移植物(骨髓)的T细胞会攻击宿主正常细胞上的抗原，造成病人多发性靶器官 的损害，这种损害常常是致死性的。近年来，BMT抗癌机理的研究有了突破， 发现GVT是一种免疫反应，由供体骨髓诱生的异体免疫反应。而且，这种反 应是供体T细胞介导的，如果排空T细胞，就同时丧失GVH和GVT。近年来 更进一步发现GVH和GVT二种反应是同一个机理、捆绑在一起的异体免疫反 应。在临床和动物实验中还发现，成功的BMT治疗能够重建嵌合型免疫系统， 会产生宿主排斥移植物的反应(HVG)。虽然HVG使移植物被排斥，却同时产 生了宿主排斥癌细胞的反应(HVT)，与GVT一样产生I型抗癌免疫反应，持 续性清除癌细胞的。实质上，GVH/GVT和HVG/HVT是二对相同的异体排斥 反应，但是，HVG只针对移植物的异体细胞，使其受到排斥，并不攻击宿主 自身组织而造成伤害。

近年来更进一步发现异体免疫反应不是唯一的，BMT使免疫杀伤细胞 CTL得到起动和加强。BMT之所以有强大的抗癌效应是由于异体免疫反应诱 生了I型抗癌免疫反应，I型免疫反应的形成又有赖于GVH。因为在产生GVH 的条件下，GVH诱发了大量的I型淋巴因子的分泌，包括IFN-γ、GM-CSF、 TNF-α等，抑制了癌症病人II型免疫环境。原因是病人的癌细胞会不断自发 产生II型细胞因子和癌细胞抑制性因子(例如IL-10，TGFβI)，尤其是在高水 平癌抗原存在的条件下，在正常抗癌反应中起主要作用的Th1细胞处于选择性 耐受状态，使TH1/TH2免疫内环境失去平衡，TH2免疫环境占优势，造成免 疫杀伤性细胞的“休眠”。这是癌细胞逃避免疫系统攻击的主要机制，称“免 疫逃逸”，这也是很多过去临床上使用过继免疫疗效不佳的主要原因。实际上， 癌症病人的免疫功能并非完全低下，免疫杀伤性细胞并未丧失功能，而是处于” 休眠”、“无能”状态，这种状态是可以逆转的。BMT的异体免疫反应最终使 免疫系统I型抗癌反应得到恢复，使免疫杀伤性细胞CTL，自然杀伤性细胞NK 得到复苏。

目前，骨髓移植在临床上，通常使用异体BMT，由HLA相近匹配的供者 提供骨髓。由于匹配的骨髓来源有限，治疗设施要求高，治疗费用昂贵，限制 了BMT在临床上的广泛使用。

【发明内容】

本发明的目的是，提供一种免疫唤醒微系统。

本发明的再一的目的是，提供一种免疫唤醒微系统的制备方法。

本发明的再一的目的是，提供一种免疫唤醒微系统的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种免疫唤醒微系统，包括 细胞和免疫微粒体，细胞和免疫微粒体通过抗体-抗原交联成免疫唤醒微系统 整体结构，所述的细胞是具有CD40L表达的CD4+T细胞，免疫微粒体是可生物 降解材料包载重组rIL-2的微粒体。

所述的免疫微粒体是表面吸附了抗Fc单克隆抗体的微粒体。

所述的免疫唤醒微系统是HLA错配的异体CD4+T细胞吸附了 mAb-CD3/mAb-CD28与表面吸附了抗Fc单克隆抗体的微粒体交联而成。

所述的可生物降解材料选自：乳酸聚乙二醇(PLG)、聚乳酸(PLA)、聚己 内酯(PCL)、聚乳酸二乙醇酸共聚物(PLGA)中的一种。

所述的细胞数和免疫微粒体数的比例为1：10。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种免疫唤醒微系统 的制备方法，包括以下步骤：

A、免疫微粒体的制备：将可生物降解材料的悬浮溶液中加入含抗Fc单克 隆抗体缓冲溶液中，将含rIL-2微球加入到上述溶液中；