[发明专利]鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗免疫效果的评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗技术领域，具体涉及鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗免疫效果的评价方法。

背景技术

鲟鱼为软骨硬鳞鱼，具有很高的经济价值，有“黑色黄金”之称。随着其野生资源的减少，人工增养殖相继出现，与之相关的商品规模化养殖相继开展。由于鲟鱼骨板坚硬，鳃部分裸露，在人工环境下进行高密度养殖，相互磨伤而容易受到感染，病害也逐渐增加，但有关其病害病原的分离、鉴定以及防治的研究资料极少。因此，疾病防治的研究是当务之急，这是保证鲟鱼养殖持续、稳定发展的关键之一。

鲟鱼细菌性疾病的发生目前已成为鲟鱼养殖业的瓶颈，鲟鱼的细菌性疾病主要有细菌性肠炎、细菌性败血症和细菌性出血病(肿嘴病)，病原主要是气单胞菌，具有极强的传染性，患病鲟鱼死亡率高，给生产造成了很大的损失。在鲟鱼疾病防治时多采用药物防治，但药物防治容易污染水质，造成药物残留现象，药量过大还会对鲟鱼的生长产生负面影响。此外，大多数药物的长期使用还造成了病原性细菌耐药性的产生，最终给疾病的防治造成了困难。近年来，免疫防治在水产病害防治中的应用已日益广泛。利用疫苗等，活化或加强动物自身的特异性免疫和非特异性免疫功能，提高抗病能力，被公认为是目前防治病害最为有效的方法之一。国内外已应用的渔用疫苗有20余种。水产病害的疫苗防治是今后的发展方向，疫苗防治既可克服治疗困难影响疗效的弊病，又可避免药物残留现象。目前关于鲟鱼细菌病的疫苗防治尚未见报道，我国对鲟鱼病的预防治疗主要还是依靠药物手段，因此开发病原菌疫苗将是鲟鱼细菌病有效的防治方法之一。

疫苗是将病原体或其代谢产物，经过人工灭活、减毒或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的生物制剂。疫苗保留了病原体刺激鱼类免疫系统的特性，当鱼体接种疫苗后，免疫系统便会产生一定的保护物质，并形成免疫记忆；当鱼体再次接触到与所接种疫苗原性一致的病原体时，免疫系统就会迅速产生更多的保护物质来阻止病原体对鱼体的伤害。全菌灭活疫苗具有操作简便、安全等优点，因此适合于目前阶段推广防治鲟鱼细菌病。

发明内容

本发明所要解决的技术问题提供了一种鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗免疫效果的评价方法。

为此，本发明公开了一种鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗免疫效果的评价方法，包括下列步骤：

a)待免鲟鱼健康检查：免疫接种的鲟鱼需摄食活动正常、体质健康；

b)免疫接种：采用注射方式进行鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗免疫接种，注射部位可为胸鳍基部、背鳍基部或腹鳍基部，其中以背鳍基部为佳；

c)免疫后养殖管理工作：监测水温、水质的理化因子溶解氧、pH、氨氮、亚硝酸盐，确保水质良好；

d)免疫效果评价：从鲟鱼特异性免疫和非特异性免疫两方面评价全菌灭活疫苗的免疫效果，测定五个指标：溶菌酶含量，总蛋白含量，抗体效价，γ-免疫球蛋白含量。

在一些实施方式里，所述鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗为嗜水气单胞菌菌株可为X1(登录号：EU669667)全菌灭活疫苗或嗜水气单胞菌ATCC35654(登录号：X74676.1)全菌灭活疫苗，灭活疫苗每尾接种量为5.0X10⁸CFU。

在一些实施方式里，温度是鲟鱼免疫应答的重要影响因子，一般免疫时水温以20-25℃为宜。水温过低，鲟鱼难以产生有效的免疫反应；水温过高，免疫时鲟鱼易产生强烈的应激反应。

在一些实施方式里，所述溶菌酶含量，总蛋白含量，抗体效价，γ-免疫球蛋白含量分别采用血清学方法及相关ELISA试剂盒检测；

在一些实施方式里，本发明所述鲟鱼细菌性疾病可为鲟鱼细菌性肠炎、鲟鱼细菌性败血症或鲟鱼细菌性出血病，最优为鲟鱼细菌性败血症。

本发明首次公开了鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗的评价方法，该方法步骤少，能对鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗进行科学地的量化评价，可为鲟鱼细菌性疾病全菌灭活疫苗的研发和生成提供了可靠的评价基础。

附图说明

图1各实验组西伯利亚鲟的血清抗体效价随时间的变化曲线。

图2各实验组西伯利亚鲟的血清总蛋白含量随时间的变化曲线。

图3各实验组西伯利亚鲟的血清免疫球蛋白含量随时间的变化曲线。

图4各实验组西伯利亚鲟的血清溶菌酶含量随时间的变化曲线。

具体实施方式

以下结合具体实施例，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。比例和百分比基于重量，除非特别说明。

1待免鲟鱼健康检查