[发明专利]海螵蛸多糖提取物CBP-S及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是从海洋生物海螵蛸中提取的一种多糖CBP-S及其用途。

背景技术

海螵蛸是海洋曼氏生物无针乌贼的内壳，为传统中药材。《本草纲目》记载海螵蛸具有各种收敛作用，可治多种内外出血，对胃溃疡及部分慢性胃炎等有效，可临床用于皮肤溃疡、褥疮等的治疗。它本身作为食品加工行业的废料，少数回收作为中药材，大部分都没有得到很好的利用，造成资源严重的浪费。关于其有效成分的报道不多，本发明人曾从海螵蛸中提取到一种多糖CPS-1并申请了专利(“海螵蛸多糖CPS-1及其制备方法和用途”，专利号200510110082.6)。但至今未见有关从海螵蛸中提取到多糖CBP-S的报道。

发明内容

本发明提供一种从海螵蛸中提取到的能防护胃黏膜急性损伤的多糖提取物，命名为CBP-S。经动物实验表明，海螵蛸多糖提取物CBP-S能减轻胃黏膜的急性损伤，具有保护胃黏膜细胞的作用。

本发明海螵蛸多糖提取物CBP-S的制备方法如下：

1.制备提取液：

将干品海螵蛸粉碎成粉末，按常规加水煮沸8-10小时，趁热抽滤得到滤液，浓缩滤液，离心弃沉淀，上清液用氯仿：正丁醇＝4：1的sevage法反复萃取至水相不含蛋白质，得提取液；

2.制备海螵蛸多糖提取物粗品：

浓缩上述提取液，加入等体积冰浴预冷的5％ TAC，混合液于冰浴下搅拌匀，将其装入3000D的透析袋流水透析2天，再用蒸馏水透析1天，以除去小分子杂质和盐类，浓缩后，加入三倍体积的95％乙醇，搅拌均匀，室温静置过夜，次日，离心弃上清，将沉淀冷冻干燥，得海螵蛸多糖提取物粗品；

3.分离纯化，制备海螵蛸多糖提取物CBP-S：

将海螵蛸多糖提取物粗品热水浴中溶于适量蒸馏水，离心取上清，将沉淀再次热水浴中溶于蒸馏水，离心取上清，合并上清液，按常规上样于DEAE SepharoseF.F XK-50离子交换柱，依次用蒸馏水和0.5mol/L NaCl溶液洗脱，用部分自动接收仪分别收集蒸馏水和0.5mol/L NaCl溶液洗脱液，取0.5mol/L NaCl溶液洗脱液，用硫酸-苯酚法检测各收集管中洗脱液的多糖，以管号为横坐标，以分光光度计检测的OD值为纵坐标绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线，合并洗脱峰部分的洗脱液，减压浓缩，浓缩液用流水透析2天，再用蒸馏水透析1天，冷冻干燥，得海螵蛸多糖提取物CBP-S。

4.海螵蛸多糖提取物CBP-S的成分分析：

1)将上述海螵蛸多糖提取物CBP-S复溶于适量蒸馏水，离心弃沉淀，上清液上样于Sepharose CL-6B凝胶柱，用蒸馏水洗脱，用硫酸-苯酚法绘制洗脱曲线，方法同前，绘制的洗脱曲线有两个峰，分别合并两个峰的洗脱液，离心取上清，分别将上清液用HPLC进行纯度检测，确定为两种较纯的多糖组分，分别命名为CBP-S1和CBP-S2，洗脱液冷冻干燥后，得CBP-S1和CBP-S2干品；

2)将上述CBP-S1和CBP-S2干品分别复溶于适量蒸馏水，离心弃沉淀，上清液分别上样于Sepharcryl S-300凝胶柱进行进一步纯化，纯化至HPLC洗脱曲线为单一对称峰后，分别对CBP-S1和CBP-S2进行结构测定。

经过紫外(200-400nm)扫描、红外扫描、单糖组分测定(气相色谱)等检测手段，分别确定了CBP-S1和CBP-S2的结构单元，它们均有7种单糖组成，其中，CBP-S1各单糖及其之间的比例为：Rha:Fuc:Man:Glc:Gal:GlcN:GalN＝1:2.8:1:6.8:3.2:2.8:2.2，以β-1，4-Glc连接为主，而CBP-S2单糖之间的比例为：Rha:Fuc:Man:Glc:Gal:GlcN:GalN＝1:5.6:1:5.6:2.6:3.6:2.8，以β-1，4-Glc和1，3，4连接的岩藻糖为主。

上述测定结果说明，本发明海螵蛸多糖提取物CBP-S主要包含两种多糖成分CBP-S1和CBP-S2，CBP-S1和CBP-S2虽然由相同的单糖组成，但所含单糖的比例不同，因而具有不同的分子量。

动物实验表明，本发明海螵蛸多糖提取物CBP-S配成的溶液对小鼠进行灌胃给药后，能有效预防无水乙醇对小鼠胃黏膜细胞的损伤。因此本发明海螵蛸多糖提取物CBP-S可用于制备防护胃黏膜急性损伤的药物。

附图说明

图1为海螵蛸多糖提取物粗品的DEAE SepharoseF.F凝胶柱洗脱曲线

图2为海螵蛸多糖提取物CBP-S1的HPLC洗脱曲线