[发明专利]一种羟基自由基的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种羟基自由基的测定方法，特别涉及一种利用萘基二苯甲烷染料—维多利亚艳蓝BO(C.I42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基的方法。

背景技术

羟基自由基(·OH)对生物体毒性强危害大，但它的反应活性大，寿命短，存在浓度低。目前，国内外报道的测定羟基自由基的方法有：分光光度法、电子自旋共振法、高效液相色谱法、荧光法、共振散射光谱法等。这些方法或仪器昂贵，或灵敏度不够。

目前尚未见利用萘基二苯甲烷染料—维多利亚艳蓝BO(C.I42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够克服上述现有技术的弊端，具有操作简便，灵敏度高、结果准确等优点的羟基自由基的测定方法。

本方法的测定原理

在水溶液中，羟基自由基氧化碘离子形成I₂，I₂与过量的I^-反应生成I₃^-阴离子，I₃^-与维多利亚艳蓝BO缔合生成艳蓝色化合物。维多利亚艳蓝在酸性溶液中显黄绿色，缔合物水溶液则呈艳蓝色，对波长571nm处的可见光有选择性吸收，通过测定溶液的吸光度可以得到溶液中羟基自由基的浓度。

本发明的技术方案

本发明所选用的试剂均为分析纯。

标准工作曲线的绘制

移1.0×10^-2mol·L^-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10^-3mol·L^-1FeSo₄0.1mL于50mL容量瓶中，取现配制的5.0×10^-4mol·L^-1的双氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP0.5g·L^-1的2.0×10^-4mol·L^-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线。

根据标准曲线获得回归方程：A＝0.06C(mol·L^-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L^-1～0.0082mol·L^-1)；其中：A为：吸光度；C为：双氧水摩尔浓度，根据反应原理知，羟基自由基的摩尔浓度与双氧水摩尔浓度成1：1的关系，为方便研究，可用双氧水摩尔浓度C代替羟基自由基摩尔浓度。

羟基自由基的测定：50mL容量瓶中，依次移入1.0×10^-2mol·L^-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10^-3mol·L^-1FeSo₄0.1mL、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP浓度为0.5g·L^-1的2.0×10^-4mol·L^-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，查标准曲线或根据标准曲线获得的回归方程计算羟基自由基浓度。本方法测试的羟基自由基浓度范围为0.0mg·L^-1～0.0082mol·L^-1。