[发明专利]松杉灵芝134菌株或其子实体分子标记及其获得方法与应用

说明书

技术领域

本发明属灵芝菌株鉴别领域，特别是涉及一种松杉灵芝134菌株或其子实体分子标记及其获得方法与应用。

背景技术

据《神农本草经》和《本草纲目》记载，灵芝有益心气、养心生血、助心充脉、安神、益脾益肺、强筋骨、利关节、治耳聋等功效。近代研究发现灵芝不但对人类三大死因的癌症、脑溢血和心脏病有疗效，还对胃肠、肝脏、肾脏、白血病、神经衰弱、慢性支气管炎、哮喘、过敏等疾病有显著疗效。林志彬认为松杉灵芝134具有增强脾脏NK细胞活性、促血浆IFN因子生成及保肝、抗肿瘤的作用。卫生部发布可用于保健食品的真菌菌种名单目录中，公布了灵芝3个种，即赤芝(G.lucidum)、紫芝(G.sinense)和松杉灵芝134(G.tsugae)。

随着对灵芝的生物学功效的不断了解，以其为原料开发的产品越来越多，销售量也越来越大，灵芝原料的质量越来越受到重视。近年来，随着灵芝各种产品的商品化，大大带动了中国灵芝栽培生产的迅速发展，同时灵芝的种质资源也在不断扩大，但是由于我国食药用菌品种登记制度尚未完善，因此灵芝的生产用菌种比较混乱，同种异名和异名同种的现象在栽培生产上非常普遍，这不仅给菌种的管理带来了难度，也给以灵芝为原料的保健品及药品等的相关产业造成了一定的经济损失。现在因为菌种问题常常造成我国灵芝产品质量难以稳定的局面，也严重地制约了我国灵芝产品走出国门，走向国际市场的步伐。

传统的分类鉴定主要依据子实体的形态学特征来进行，包括担孢子的大小和子实体真皮菌丝的形态特征，但是子实体的许多形态学特征往往随着生长条件的不同而发生变化，而且许多鉴别性特征经常是几个种所共有的，这给传统的分类学带来了很大的困难，仅仅依据形态学特征进行菌种鉴定不是很可靠。因此，寻找可靠的鉴定手段，对灵芝产业的进一步发展尤为重要。

近年来，国内对栽培灵芝菌株的分类研究也越来越多，主要是集中在应用拮抗实验、RAPD(Random amplified polymorphic DNA，随机扩增的多态性DNA)分析及同工酶分析技术方面。

张松等(1995)通过对4株灵芝菌株的酯酶同工酶酶谱的分析发现，供试的四个菌株存在5条相同的酶带，说明它们具有灵芝的某些共同的遗传特征，在其代谢过程中具有某些相似的生理活动，但各菌株在酶带数目、Rf值及含量百分比上存在差异，均具有自己的特征酶带，同时发现子实体形态学特征相似的，酯酶同工酶酶谱也相似，亲缘关系比较近，这些说酯酶同工酶分析对于灵芝的分类鉴定有一定的价值。

赵明文等(2003)利用RAPD技术对生产中常用的灵芝属8个菌株的亲缘关系进行了分析。根据UPGMA构建的树状图将8个菌株在较低的相似水平上分成3个明显不同的组：第1组包括黑芝(Ganoderma atrum)、松杉灵芝134(Ganoderma tsugae)、圆芝(Ganodermarotundatum)、灵芝0770(Ganoderma lucidum 0770)和韩国灵芝(Ganoderma lucidum HG)；第2组包括密纹灵芝(Ganoderma crebrostriatum)和紫灵芝(Ganoderma sinense)；第3组为树舌灵芝(Ganoderma applanatum)。这一结果与经典分类结果基本相符，表明RAPD技术可以用来区分生产中一些常用的灵芝种，同时说明灵芝生产用种之间遗传差异较大，可能是造成灵芝产品研究比较混乱的重要原因。

1999年我国签署了《国际植物新品种保护法》，这不仅要求我们尊重其它国家的品种知识产权，同时也要加强保护我们国家自己的品种知识产权，为了建立食用菌新品种登记制度来真正保护我国的品种产权，必须首先建立成熟的品种鉴定技术，为新品种登记奠定基础。

随着分子生物学技术的快速发展，特别是分于标记和基因标记技术的建立与成熟，为发展简便、快速、准确的鉴定技术提供了有效手段。SCAR(Sequence Characterized AmplifiedRegion)标记是一种十分稳定的分子标记，在应用上具有迅速、简便、低成本的特点，但目前尚未有对松杉灵芝134的SCAR分子标记，以快速鉴定松杉灵芝134。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种松杉灵芝134菌株或其子实体特异性分子标记及其获得方法与应用，以便对赤芝菌种121进行简便、快速、准确的鉴定和检测。