[发明专利]一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法无效
| 申请号： | 200810204718.7 | 申请日： | 2008-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN101750482A | 公开（公告）日： | 2010-06-23 |
| 发明（设计）人： | 何培民;蔡春尔;周铭;汪卿;柳俊秀;李春霞 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | G01N33/52 | 分类号： | G01N33/52;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海智力专利商标事务所 31105 | 代理人： | 瞿承达 |
| 地址： | 201306 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 制备 紫菜 蛋白 荧光 探针 方法 | ||
1.一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，其特征在于该方法在温度为20℃条件下进行以下各步骤：
(1)以3-(2-吡啶二巯基)丙酸n-羟基琥珀酰亚胺酯与R-藻红蛋白摩尔比为40∶1进行R-藻红蛋白的衍生化，摇床避光低速振荡2小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集衍生化的R-藻红蛋白；
(2)以二硫苏糖醇与抗体摩尔比为500∶1进行抗体的巯基化，摇床低速振荡1小时，用Sephadex G-25脱盐柱收集巯基化的抗体；
(3)按衍生前R-藻红蛋白与抗体的质量比3∶5的比例取衍生化的R-藻红蛋白与巯基化的抗体混合，摇床低速震荡12小时，后加入100μl的N-乙基马来酰亚胺，反应30分钟，接着以Sephacryl S-300HR层析柱分离纯化，洗脱液为50mmol/L磷酸盐缓冲液+150mmol/L氯化纳、PH7.0，收集分离的交联产物，即为条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针。
2.一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，其特征在于所述的摇床低速震荡为50转/分。
3.一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，其特征在于所述的N-乙基马来酰亚胺为用无水二甲基亚砜溶解，浓度为80mmol/L。
4.一种制备条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针的方法，其特征在于所述的Sephacryl S-300HR层析柱为￠16mmX1000mm的Sephacryl S-300HR层析柱。
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