[发明专利]检测人前列腺癌中17β一羟基类固醇脱氢酶7表达量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种检测人前列腺癌样本中17 β一羟基类固醇脱氢酶7(17β-HSD7)mRNA表达量的实时荧光定量PCR试剂盒。

背景技术

前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤之一。根据资料显示，前列腺癌发病率和病死率 存在明显的地区差异，美国、北欧、西欧和澳洲是前列腺癌的高发地区，而亚洲和北 非是相对低发地区。但前列腺癌低发地区从20世纪70年代起发病率也有大幅度上升 的趋势.。过去，我国前列腺癌发病率较低，但随着人均寿命的延长、膳食结构的改变 及诊断技术的进步，其发病率在逐年提高，已跃居为男性泌尿生殖系统恶性肿瘤的第 三位。

临床目前的诊断技术主要有前列腺的肿瘤标志物、直肠指检(DRE)、影像学检查和 前列腺穿刺活检等。目前前列腺特异性抗原(PSA)作为一种无创简便的检测手段已被 广泛应用于前列腺癌的诊治。然而一个理想的前列腺癌肿瘤标志物应具有前列腺特异 性、能够早期诊断肿瘤并能够同良性前列腺增生症相鉴别、便于检测和随访等特点。 显然这些并不是PSA就能够全部满足的，因此，寻找更多的肿瘤标志物，对于前列腺癌 的早期诊断和治疗有重要意义。

人17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD7)是一个膜相关还原酶，它是催化低生物活 性的雌酮生成为与高生物活性的雌二醇的关键酶之一，并能转化双氢睾酮为5α-雄烷 -3β，17β-二元醇，其催化还原的部位为底物17位点或3位点的酮基团。17β-HSD7对 黄体酮和20a一羟基孕酮次要的3β-HSD样活性也被检测到。人17β-HSD7存在于生成类 固醇的组织和一些周缘组织，象肝、肺和胸腺，除了性激素外17β-HSD7也有其它的底 物，在胆固醇的生物合成中，17β-HSD7起酮类固醇还原酶作用。将酵母甾酮转化为酵 母甾醇。

17β-HSD7作为性激素代谢的关键酶之一与前列腺癌的发生与发展有着密切的关 系，其表达量在在前列腺癌的病程中呈现规律的变化，因此检测17β-HSD7的表达量对 于前列腺癌的早期诊断，治疗，预后评估都有着潜在的价值。

传统的基因检测技术主要运用聚合酶链反应(PCR)或逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)的方法大量扩增待测基因，然后通过溴化乙锭染色和琼脂糖凝胶电泳定量 待测基因。以上方法有着极高的高灵敏度，但基于PCR反应的特点，反应终点的产物量 往往无法正确反映反应初始阶段DNA的含量，因此定量不够精确，同时其检测的分辨率 也不高，DNA的量的差异如果低于五倍，往往检测不出。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测人前列腺癌样本中17β一羟基类固醇脱氢酶7(17β -HSD7)mRNA表达量的实时荧光定量PCR试剂盒。

本发明的试剂盒包含：2×逆转录反应液，20×逆转录酶，DEPC-H2O，2×PCR反 应液，20×检测用引物、荧光探针，标准品。

其中2×逆转录反应液含有RT缓冲液、DEPC-H2O、Oligo(dT)、dNTPs、Rnasin。

其中2×PCR反应含有PCR缓冲液，MgCl₂，dNTPs，Taq酶。

所述的检测用引物包括：

17β-HSD7上游引物序列：5′-GCGAAGATGCGAAAGGTGG-3′

17β-HSD7下游引物序列：5′-CATGTTCCTGCACGCCAAAC-3′

GAPDH上游引物序列：5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGT-3′

GAPDH下游引物序列：5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′

所述的荧光探针包括：

17β-HSD7荧光探针：5′-FAM-GAAAGGTGGTTTTGATCACCG-TAMRA-3′

GAPDH荧光探针：5′-FAM-CAAGCTTCCCGTTCTCAGCC-TAMRA-3′

本发明中，2×逆转录反应液，2×PCR反应液，DEPC-H2O保存于4℃；

20×逆转录酶，20×检测用引物、荧光探针保存于-20℃。

标准品为人前列腺癌细胞系LNCaP的cDNA。

本发明试剂盒具有如下特点：