[发明专利]一种免PCR扩增无需检测仪器的核酸分析方法

权利要求书

1.一种携带检测探针的生物素-亲和素的复合物，其特征在于，所述复合 物包括：

(a)固相载体；

(b)根序列，所述的根序列是固定于所述固相载体表面上的寡核苷酸单链；

(c)引发序列，所述的引发序列是互补结合于所述根序列的、并且在一端 标记有生物素的寡核苷酸单链；

(d)生物素-亲和素的n级复合物，其中n为6-20的正整数；并且第1级 亲和素结合于所述引发序列上的生物素；

(e)生长序列，所述的生长序列是两端标记有生物素的寡核苷酸单链，所 述生长序列中位于一端的生物素与第n级亲和素结合，而位于另一端的生物素 与第n＋1级亲和素结合，其中n为6-20的正整数；和

(f)检测探针，所述的检测探针是一端标记有生物素的寡核苷酸单链，而 且所述检测探针中的生物素与第n级亲和素结合，并且所述的检测探针包括与 目标核酸检测区互补的检测互补结合区以及与信号探针互补的信号互补结合 区。

2.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的固相载体是微球。

3.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，n为 7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19或20。

4.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的根序列的长度为20-60 个碱基。

5.如权利要求4所述的复合物，其特征在于，所述的根序列的长度为25-50 个碱基。

6.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的引发序列的长度为 10-50个碱基。

7.如权利要求6所述的复合物，其特征在于，所述的引发序列的长度为 15-40个碱基。

8.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的生长序列的长度为8-30 个碱基。

9.如权利要求8所述的复合物，其特征在于，所述的生长序列的长度为 10-20个碱基。

10.如权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述的检测探针的长度为 40-80个碱基。

11.如权利要求10所述的复合物，其特征在于，所述的检测探针的长度为 50-70个碱基。

12.一种非诊断目的的核酸检测分析方法，其特征在于，在权利要求1所述 的生物素-亲和素的复合物存在下进行检测。

13.一种权利要求1所述的生物素-亲和素的复合物在制备无需聚合酶链反 应的核酸检测的检测试剂中的用途。

14.一种非诊断目的的、无需聚合酶链反应的、用于检测样品中是否存在 目标核酸序列的核酸检测方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(a)将待检测样品与权利要求1所述的携带检测探针的生物素-亲和素的复 合物混合，其中所述的待检测样品是含核酸单链分子的溶液，从而形成“目标 核酸-生物素—亲和素复合物”的第一偶联物；

(b)分离所述的第一偶联物，并向含所述的第一偶联物的溶液加入与所述 生物素—亲和素复合物上的检测探针互补结合的信号探针，从而形成“目标核 酸-生物素—亲和素复合物-信号探针”的第二偶联物；

(c)分离所述的第二偶联物；

(d)从分离的所述第二偶联物上解离下信号探针；和

(f)检测所述信号探针的存在与否和或数量，从而确定在样品中是否存在 目标核酸序列或其数量。

15.一种制备携带检测探针的生物素-亲和素的复合物的方法，包括步骤：

(a)将用作根序列的第一寡核苷酸单链固定于固相载体，

(b)将用作引发序列的第二寡核苷酸单链与所述根序列接触，所述的第二寡 核苷酸单链是在一端标记有生物素的寡核苷酸单链，从而形成相对稳定的“根 序列-引发序列”杂合体，其中所述的引发序列互补结合于所述的根序列；随后 去除过量的引发序列；

(c)将亲和素与所述引发序列上的生物素接触并结合；随后去除过量的、未 结合的亲和素，从而获得第1级生物素-亲和素的复合物；

或者所述步骤(c)还包括重复以下步骤(c1)-(c2)共1至n-1次，从而获得 第n级生物素-亲和素的复合物，其中，n为6-20的正整数：

(c1)将用作生长序列的第三寡核苷酸单链与上一步骤获得的生物 素-亲和素的复合物接触，其中所述第三寡核苷酸单链是两端标记有生 物素的寡核苷酸单链，从而使得所述生长序列中位于一端的生物素与上 一步骤中形成的结合状态的亲和素形成结合；随后去除过量的、未结合 的生长序列；

(c2)将亲和素与步骤(c1)中所述生长序列另一端的生物素接触并 结合；随后去除过量的、未结合的亲和素；

(d)将检测探针与步骤(c)的第n级生物素-亲和素的复合物接触并结合， 从而制得携带检测探针的生物素-亲和素的复合物，

其中所述的检测探针是一端标记有生物素的寡核苷酸单链，而且所述检测 探针中的生物素与第n级亲和素结合，并且所述的检测探针包括与目标核酸检 测区互补的检测互补结合区以及与信号探针互补的信号互补结合区。