[发明专利]连翘酯苷A在制备治疗乙型肝炎药物中的用途

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及连翘酯苷A的医药新用途。

背景技术

连翘酯苷A(Forsythoside A)是从木犀科连翘属植物连翘(Fructus Forsythiae)中提取的有效成分。以前是以连翘苷作为考察连翘提取工艺的指标，近年来随着连翘有效成分研究的深入，发现连翘苷无抗菌活性，发挥抗菌活性的是连翘酯苷A，其结构式如下：

近年来，有文献报道，连翘酯苷有良好的抗菌作用：如王宏军等报道连翘酯苷在体外和体内对引发奶牛乳房炎的主要致病菌金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、无乳链球菌均有较好的抑制作用；如冯淑怡等报道，连翘酯苷对绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡菌球菌致病的模型小鼠具有很好地抗感染作用。连翘酯苷中几乎全部是连翘酯苷A在起作用。

目前现有技术对连翘酯苷A的抗病毒药理活性研究很少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供连翘酯苷A在制药中的新用途，具体涉及连翘酯苷A在制备治疗乙型肝炎药物中的用途。

本发明通过连翘酯苷A体外抗乙肝病毒试验，观察连翘酯苷A抗乙肝病毒的药效作用。本发明试验方案采用的是连翘酯苷A的冻干粉针剂，但连翘酯苷A的作用也适用于口服制剂。

本发明随后的连翘酯苷A体外抗乙肝病毒试验结果表明：采用HepG₂2.2.15细胞模型，连翘酯苷A在体外的细胞毒性TC₅₀＝739μg/mL；对S抗原的抑制IC₅₀＝149.4μg/mL；对e抗原的抑制IC₅₀＝139.6μg/mL；对细胞HBV-DNA的抑制IC₅₀＝56.3(μg/mL)。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。

实施例1(连翘酯苷A体外抗乙肝病毒试验)

一、试验目的：

观察连翘酯苷A抗乙肝病毒的药效作用。

二、试验材料：

受试药物：连翘酯苷A冻干粉针剂，由上海玉森新药开发有限公司提供，批号：060909。

连翘酯苷A的制备方法可参见中国专利CN101081855A、CN101081856A、CN101081857A、CN1899382A或CN101209286A。

受试药物溶于DMSO制备成20mg/mL，然后用DMEM培养液稀释成不同的浓度。

细胞模型：乙型肝炎病毒(HBV)转染HepG₂细胞，即HepG₂2.2.15细胞。

阳性对照药物：恩替卡韦。

药物毒性试验：MTT法MTT(Aldrich)。

HBV抗原检测：ELISA法上海实业科华生物技术有限公司试剂盒。

HBVDNA检测：用荧光定量PCR方法检测。

三、试验方法(主要参考文献：中华人民共和国卫生部药政局.新药临床及临床前研究指导原则汇编.1993)

1、药物毒性试验：

96孔培养板每孔加入120μl(4×10⁵cells/mL)Hep G₂.2.2.15细胞，37℃，5％CO₂单层培养72小时，弃去上清液，加入按要求配制成5个浓度的药液，同时设细胞对照组。每3天更换样品液一次，共培养9天，弃去上清液，加入90μL of DMEM and 10μL of the 5mg/mlMTT在培养箱内保持3hours.弃去上清液，加入100μl of DMSO，培养板在50rpm振荡5min，在490nm处读O.D，测定无毒浓度(TCD0)。

2、病毒抗原抑制测试：

96孔培养板每孔加入120μl(4×10⁵cells/mL)Hep G₂.2.215细胞，37℃，5％CO₂单层培养72小时，弃去上清液，加入按要求配制成5个浓度的药液，同时设细胞对照组和阳性药物对照组。每3天，更换样品液一次，共培养9天，分别取上清液用ELISA方法测定HBsAg、HBeAg，与细胞对照组比较，计算抗原抑制率(％)及IC50。

3、病毒DNA抑制测试：