[发明专利]一种检测牛乳中免疫球蛋白lgG含量的试剂盒及预包被酶标板的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测牛乳球蛋白含量的试剂盒及预包被酶标板的制备方法。

背景技术

免疫球蛋白G(IgG)作为牛初乳中一种非常重要的免疫因子，其含量的多少是衡量牛初乳及其产品优劣的一个重要指标。IgG也是免疫乳及其制品的主要功能成分，其含量是免疫乳及其制品质量好坏的最重要标准。对牛乳IgG的检测还可以评估常乳中是否掺有牛初乳以及判断牛乳是否掺假。因而，牛乳IgG的检测对于乳制品的质量控制有着非常重要的意义。

目前检测牛乳中免疫球蛋白1gG的手段主要有以下几类：一、免疫单向扩散、免疫双向扩散以及火箭免疫电泳，这些方法具有操作简便、设备要求低的优点，但存在着检测时间长、精确性差的缺点；二、胶体金免疫层析技术虽然可以快速检测，但只局限于定性或半定量检测，无法达到精确检测的目的；三、高效液相和毛细管电泳虽然能够快速、精确检测，但对设备和操作人员的要求极高，不适合常规工厂和普通试验室分析，普及困难。

发明内容

本发明是为了解决现有检测手段中存在检测时间长和精确性差或对设备和操作人员的要求极高造成普及困难的缺陷，而提供一种检测牛乳中免疫球蛋白1gG含量的试剂盒及预包被酶标板的制备方法。

本发明检测牛乳中免疫球蛋白1gG含量的试剂盒是由10μg的牛免疫球蛋白1gG、1.0mL的辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG抗体稀释液、50mL的稀释液、50mL洗涤液、10mL的反应终止液和20mL的显色液制成；其中辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG抗体稀释液是将辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgG抗体用pH值为8.0的Tris缓冲液稀释至9000～11000倍；稀释液为pH值为8.0的Tris缓冲液；洗涤液为Tween20质量浓度为0.05％、pH值为8.0的Tris缓冲液；反应终止液为浓度为2mol/L的硫酸；显色液按照体积份数由20份的pH值为5.0的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、1份的DMSO浓度为2g/L的TMB溶液和0.064份的质量浓度为0.75％的H₂O₂水溶液组成。

本发明检测牛乳中免疫球蛋白1gG含量的预包被酶标板按照以下方法制备：一、用戊二醛质量浓度为0.8％、pH值为9.6的Tris缓冲液将兔抗牛IgG抗体稀释400～500倍，向酶标板上各孔加入兔抗牛IgG抗体稀释液100μL，再将加入抗体稀释液后的酶标板在37℃的条件下孵育2h或在4℃的条件下用包被液进行包被8～16小时，再将酶标板各孔洗涤3次；二、向步骤一洗涤后的酶标板各孔加入含有明胶质量浓度为1％、pH值为8.0的Tris缓冲液200μL，在37℃的条件下孵育1h后再洗涤3次；三、向步骤二洗涤后的酶标板在-20℃的条件下保温1h后，再在-20℃～-40℃的条件下真空冷冻干燥8～10h；即得到预包被酶标板；其中步骤一和步骤二的洗涤为向酶标板上各孔加入250μLTween20质量浓度为0.05％、pH值为8.0的Tris缓冲液，静置3分钟后，再将孔内的溶液吸尽。

本发明的试剂盒具有以下优点：

1、简化了酶联免疫吸附法检测牛乳中免疫球蛋白1gG过程的操作步骤，缩短了检测时间，单次检测时间仅需3～4小时，而免疫单向扩散法和火箭免疫电泳法的检测时间通常需要至少8小时和24小时，同时试剂盒的检测结果灵敏度可达到ng级；2、试剂盒的检测范围在100～1000ng/mL之间，试剂盒的检测灵敏度达30ng/mL，在检测时组内变异系数为1.86％～4.22％，组间变异系数为3.82％～9.86％，回收率为98.07％～105.36％，具有很好的可重复性和可靠性；3、操作人员不需要特殊培训，易于普及。

本发明制备的预包被酶标板具有以下优点：

本发明的酶标板缩短免疫吸附法检测免疫球蛋白1gG的检测时间，可在3～4小时完成检测分析，简化了操作，提高检测准确性；将本发明制备的预包被酶标板和本发明的试剂盒配合使用检测牛乳中免疫球蛋白1gG含量，使用方便，对操作人员没有特殊要求，有效缩短了检测时间，检测结果准确，检测费用低，单次检测成本为5元左右。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。