[发明专利]葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用

说明书

相关申请的交叉引用

无。

关于联邦资助研究的声明

无。

技术领域

本发明涉及免疫测定领域，更特定地涉及使用葡萄糖胺聚糖 (glycosaminoglycan)来减少免疫测定中的非特异性结合。

背景技术

生化结合测定广泛应用于测定在生物样品中的分析物的存 在和浓度。这种测定是基于结合伙伴的概念。相关分析物结合于分析 物结合剂(例如，分析物的抗体或分析物的受体)，因此所述分析物 和所述分析物结合剂被称为“结合伙伴”。当结合伙伴中的一个结合于 固相时，所述测定被称为异相测定(heterogeneous assay)。这种异相 测定包括，例如夹层法、间接法和竞争的方法，在本领域中所有术语 易于确认。

测定的灵敏度典型地指分析物的最小的量，当与缺少所述分 析物时所获得的信号读取相比，所述分析物导致测定所产生的信号在 统计学上的显著的变化。人们希望提高灵敏度，这是因为其允许分析 物的量更小以及分析物的总体上的更为精密的测定。

非特异性结合指在应用固相的异相测定中结合伙伴的非特 异性相互作用。非特异性结合通常减小所述异相测定的灵敏度，因此 希望减少这种非特异性结合。

已知许多用于该目的的方法。例如，蛋白质例如牛血清白蛋 白(BSA)、明胶和酪蛋白已经加入到测定试剂中或预吸附到所述固 相上来阻断非特异性结合的吸附位点。另外，文献已经报道了通常在 高浓度下的各种表面活性剂的使用。

尽管这些技术可有助于减少一些非特异性吸收，但很多技术 已经干扰了所需结合伙伴的特异性相互作用。这些技术也可引起在结 合伙伴间所形成的络合物的置换。另外，尽管使用高浓度的蛋白质和 表面活性剂，大量的非特异性结合仍然典型地存在于很多异相测定 中。确实需要在异相测定中的减少非特异性结合的替代性方法。

对于心肌肌钙蛋白I的测定特别如此，其中测定的分析物水 平非常低，对于精确的和可用的结果来说提高灵敏度是必要的。心肌 肌钙蛋白I测定有助于急性心肌梗塞的精确诊断和关于死亡率的风 险、心肌梗塞或急需血管形成术操作的局部缺血事件的增加概率的具 有急性心肌梗塞的非ST片段的患者的风险分层评定(risk stratification)。

肌钙蛋白I(TnI)是通常在肌肉组织中连同肌钙蛋白T和肌 钙蛋白C发现的蛋白质，调节肌动蛋白和肌球蛋白钙依赖性的相互作 用(Tobacman，Annu Rev Physiol 58：447-481，1996)。三种同种型的TnI 已经确定：一种与快缩骨骼肌相关，一种与慢缩骨骼肌相关，一种与 心肌相关(Wilkinson and Grand，Nature 271：31-35，1978；Bodor，J Clin Immunoassay 17(1):40-44，1994)。所述心肌肌钙蛋白(cardiac)形式 在N端具有另外的31个氨基酸残基，且是在心肌中存在的仅有的肌 钙蛋白亚型(isoform)(Vallins等，FEBS Letts 270(1，2):57-61，1990)。

临床研究已经表明心肌肌钙蛋白I(cTnI)在急性心肌梗塞 (AMI)后的4-6小时的血流中是可测定的且此后的数天内是保持提 高的(Mair等，Clin Chem 41(9)：1266-1272，1995；Larue等，Clin Chem 39(6):972-979，1993)。因此，cTnI的提高掩盖了肌酸激酶-MB(CK-MB) 和乳酸脱氢酶的诊断的窗口(Bodor，J Clin Immunoassay 17(1):40-44， 1994)。进一步的研究已经表明cTnI对于心肌损伤比CK-MB具有更 好的临床专属性(Adams等，Circulation 88(1)：101-106，1993；Apple等， Clin Chim Acta 237：59-66，1995)。