[发明专利]黄病毒NS1亚单位疫苗

说明书

此案是申请日为2002年11月20日、中国申请号为02824307.2、 发明名称为“黄病毒NS1亚单位疫苗”的发明申请的分案申请。

本发明涉及黄病毒(特别是登革热病毒)的NS1蛋白或其部分，其可用于 接种以抵抗所述黄病毒和抵抗一种或多种其它黄病毒。本发明进一步涉及 通过接种能用于抵抗登革热病毒所有血清型的来自一种登革热病毒血清 型，特别是血清型2的NS1蛋白或其部分。本发明进一步涉及含有编码黄 病毒NS1或其部分的表达盒的DNA，含有所述DNA的载体和含有或表达 黄病毒NS1的疫苗。

背景技术

登革热的致病因素是登革热病毒，其属于黄病毒科的黄病毒属(Burke and Monath，2001)。黄病毒中一个非常重要的亚群是称做蚊媒 (mosquito-bome)黄病毒的群体，即由蚊子传播的黄病毒的群。这个群除了上 述登革热病毒外，还包括其它重要病毒，如西尼罗病毒(West nile virus)、日 本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)和黄热病病毒(Fields Virology，ed.by Fields B.N.，Lippincott-Raven Publishers，3rd edition 1996，ISBN： 0-7817-0253-4，pages 931-1034)。由这些病毒传播的典型疾病是由西尼罗病 毒引起的西尼罗热和西尼罗脑炎，由日本脑炎病毒引起的脑炎，由黄热病 病毒和登革热病毒引起的黄热病，由登革热病毒引起的登革出血热(DHF； 见下面)和登革休克综合征(DSS)。

黄病毒为包膜单链正链RNA病毒，其由三种结构蛋白组成：与病毒基 因组结合形成核衣壳的衣壳蛋白(C)，所述核衣壳由锚定有M(膜)和E(包膜) 蛋白的脂质双层包围。基因组大约为11kb，且包含编码约3400个氨基酸残 基的多蛋白前体的单一开放阅读框。每种病毒蛋白都通过细胞蛋白酶和病 毒蛋白酶的作用由此前体产生。三种结构蛋白(C，M和E)衍生自多蛋白的 N末端部分，它们之后是七种非结构蛋白：NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A， NS4B和NS5(Lindenbach and Rice，2001)。

存在于所有黄病毒中的糖蛋白NS1倾向于对病毒活力是必需的。登革 热病毒NS1从哺乳动物感染细胞中以可溶六聚体形式分泌出来(Flamand等， 1999)。此非共价结合六聚复合物由3个二聚亚基形成，具有310kDa的分 子量。二聚化是NS1蛋白输出到质膜的先决条件，在质膜上，它作为被感 染的细胞表面唯一的病毒驻留蛋白。

在哺乳动物细胞中，所转运的部分NS1被释放到细胞外环境中，而在 利于登革热感染的昆虫细胞系中却不会如此。细胞外NS1以可溶蛋白的形 式分泌，其中可溶蛋白以较高级六聚寡聚形式存在，或者以与微粒结合而 不与病毒粒子结合的形式分泌。此外，已经发现NS1在感染登革热病毒的 患者的血清中循环，这表明NS1分泌可能是人宿主中黄病毒感染过程中的 一个重要事件。在黄病毒感染的过程中，NS1蛋白引起很强的抗体反应， 这种反应有助于从宿主中清除感染病毒，推测该清除是通过补体介导途径 (Schlesinger，J.J.等，1987)和依赖抗体的细胞毒性(ADCC)(Schlesinger，J.J.等， 1993)。

登革热病毒有四种血清型：登革热病毒血清型1(Den-1)到登革热病毒血 清型4(Den-4)，该病毒是黄病毒属中与感染人类有关的最重要成员，它引起 的疾病从感冒样症状到严重的或致命的疾病，登革出血热及休克综合征。 登革热爆发一直是热带和亚热带密集居住地区的一个主要公众卫生问题， 在这些地区蚊媒丰富。

世界许多地区都十分关注由蚊媒黄病毒引起的登革热感染和其它疾病 的传播，因此大力开发可以预防登革热(DF)和登革出血热(DHF)的登革热疫 苗，并获得了对保护接种个体抵抗由某些或所有蚊媒黄病毒引起的感染有 用的疫苗。