[发明专利]一种玻璃化冷冻承载器及其使用方法有效
申请号: | 200810215681.8 | 申请日: | 2008-09-12 |
公开(公告)号: | CN101671627A | 公开(公告)日: | 2010-03-17 |
发明(设计)人: | 陈子江;吴克良;李媛 | 申请(专利权)人: | 陈子江 |
主分类号: | C12M1/24 | 分类号: | C12M1/24;C12N5/00 |
代理公司: | 北京邦信阳专利商标代理有限公司 | 代理人: | 王昭林;崔 华 |
地址: | 250021山东省*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 玻璃化 冷冻 承载 及其 使用方法 | ||
技术领域
本发明涉及一种保存生物物质的冷冻承载器及其使用方法,具体 涉及一种保存生物物质的玻璃化冷冻承载器及其使用方法。
背景技术
目前,用于保存生物物质的玻璃化冷冻承载器有多种,如Cryoloop, Cryoleaf,Cryotip,electron microscopic grid等,其应用效果相似,但是都 有一个共同的缺点,就是不能隔离液氮。将细胞装入承载器后,细胞直 接与液氮接触,容易造成液氮污染以及液氮与样品之间的交叉污染。目 前,本领域技术人员对玻璃化承载器作了很多尝试,如用拉长的脉管或 玻璃毛细管用作细胞或胚胎的承载器,虽然取得了一定的成功,但还是 不能完全解决冷冻速率以及液氮污染等问题。
发明内容
针对以上技术缺陷,本发明涉及一种新的保存生物物质的玻璃化 冷冻承载器,所述玻璃化冷冻承载器包括内微管3、内帽1、内环4、 薄膜2、外管7、外管孔6和外帽5;其中,所述内微管3其上端开口与 内帽1相连并穿过内帽1使其开口与外界相通且由外帽5封闭,内微管3 下端开口与内环4相连。
本发明玻璃化冷冻承载器,所述薄膜2密闭内环4或密闭内微管3 和内环4,或者与内环4为统一整体,其中本发明优选薄膜2密闭 内微管3和内环4;薄膜2与内帽1可以相连也可以不相连。
其中,所述薄膜2为透明、高韧性、高热传导性的薄膜,具体如 聚乙烯、聚丙烯薄膜,聚氟乙烯薄膜。本发明玻璃化冷冻承载器中,所 述内微管3的内径为140-450μm,内微管3的长度为2cm-4cm。
本发明玻璃化冷冻承载器中,所述内环4的形状为密闭型的圆形、 密闭型的椭圆形、密闭型的水滴形或者半开口弓形。密闭型内环即内环 正好与内管形成统一的整体,没有断口;半开口弓形即其中一端与内管 相连,另外一端与内管不相连,利用弓形材料的韧性使薄膜撑开。
本发明玻璃化冷冻承载器中,所述内帽1的直径大于外管7的内径 且小于外管7的外径。
本发明玻璃化冷冻承载器中,所述外管7上端开有外管孔6,用以渗 入液氮。
本发明玻璃化冷冻承载器中,所述内微管3、内帽1、外管7及 外帽5由透明、耐超低温或具有高热传导性的材料制成,如聚氟管、 聚碳酸酯管。
内环4由金属丝制成,例如铜丝、钢丝或者铂金丝等;本发明内环4 也可以由其它的具有一定强度的丝状材料诸如塑料丝或者尼龙丝等制 成。
本发明还提供一种玻璃化冷冻承载器的使用方法,所述方法包括 如下步骤:
1)用拉细的巴斯德滴管或毛细管将生物物质8连带少量冷冻液通过 内微管3放置于内环4内,然后用盖上内帽1;
2)将带有生物物质的内微管3、内环4、内帽1浸入液氮容器中的 液氮中,其中内帽1的上端部分不完全浸入液氮,之后将外管7也浸入 该液氮中,在该液氮中将带有生物物质的内微管3、内环4、内帽1装入 外管7中,盖上外帽5,并于液氮中保存。
本发明中,所述生物物质为各种类型的细胞或者胚胎,或者直径大 小为100-300μm的组织块。
本发明方法中,由于液体和薄膜之间的表面张力使得生物物质被紧 夹于两层薄膜之间,并使得生物物质周围所含的液体量达到最少。
本发明玻璃化冷冻承载器避免了生物物质与液氮直接接触,减少了 液氮污染,且操作迅速、安全和便捷;另外,采用本发明方法保存 生物物质,由于液体与膜之间的表面张力,使得玻璃化冷冻时生物物质 周围含有最少量的冷冻液,无需精确控制置于环上液体的量,提高了 冷冻效果。
附图说明
图1为玻璃化冷冻承载器的结构示意图;
图2为玻璃化冷冻承载器的局部示意图。
具体实施方式
下面结合附图和优选实施例对本实用新型作进一步的说明,但本发 明并不仅受其限制:
如图1和图2所示的一种玻璃化冷冻承载器,图2为玻璃化冷冻承 载器的局部结构示意图。该承载器包括内微管3、内帽1、内环4、 薄膜2、外管7及外帽5。其中,内微管3上端开口与内帽1相连并穿过 内帽1使其开口与外界相通且由外帽5封闭,内微管3下端开口与内环4 相连,环内中央为生物物质8;薄膜2封闭内微管3和内环4,外管7中 充满液氮9,并在外管7的上部开有外管孔6。
实施例1:将人卵母细胞置于玻璃化承载器中的冷冻
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