[发明专利]一种双标记纳米金探针及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制药领域，具体涉及一种具有生物活性的双标记纳米金探针及其制备方法和这种纳米金探针在超微量抗原检测中的应用。 

背景技术

近年来医学诊断技术迅速发展，免疫测定技术也日新月异.而作为免疫测定技术的一个重要分支--标记免疫测定技术是最为活跃的。 

1959年，美国学者Berson和Yalow建立放射免疫分析(Radio Immunoassay，RIA)法，这种标记免疫测定开拓了标记免疫测定的新领域。由于RIA具有灵敏度高，特异性强，简便等优点，RIA具有一定的生命力，但因为它必须使用放射性核素，需要防护、防止污染；标记物有效使用时间短，难以实现操作和测量的自动化等，它的进一步发展受到一些局限，因此，不少学者进行了新标记物的探索。 

1971年，Engvall和Perlaman及Weeman和Schuur两组学者用酶代替同位素制备酶标记试剂，创立了酶免疫分析技术(Enzyme Immunosorbent Assay，EIA)。至今有二十多种酶已被应用于EIA，，其中以辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)为主，EIA除了避免放射性同位素的危害外，更重要的优点是酶标记物有效期更长，但普通的EIA灵敏度不高，而后来发展的荧光免疫分析(Immunofluorescence Assay，FIA)和化学发光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)提高灵敏度和检测发范围。 

发现和应用新的标记物是免疫测定技术的主要研究方向之一，纳米技术的介入也为标记免疫测定技术的研究发展提供了无穷的想象空间。纳米粒子(英文名称为nanoparticles)是指粒径在1-100范围内的粒子，也称超微粒子(英文名 称为ultrafine particles)，其处在原子和宏观物体交界的过渡区域内，具有特殊的性能。纳米粒子本身具有小尺寸效应，表面效应，化学反应活性等独特的物化特性，能与生物体有特殊的相互作用，因此，以纳米微粒、脂质体等作为标记物载体放大反应的方法应用广泛。其中，以纳米金标记免疫测定尤为突出。 

1971年，faulk等将纳米金与兔抗沙门氏菌血清结合，用免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面抗原，开创纳米金标技术(Faulk，CM.Taylar.An immunocolloidalmethod for the electron microscope.Immunochemistry.1971，8：1080-1084.)。1981年，Danscher建立了用银显影液增强光镜下金颗粒的可见性的免疫金银染色法(Immunogold—sliver staining，IGSS)，目前被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域，是目前免疫组织化学技术中较常用的敏感方法之一。 

目前，在快速免疫诊断方面，以斑点免疫金银染色(Dot-immunogold silverstaining，Dot—IGSS)，快速免疫金渗滤法(Dot-immunogold filtration assay，DIGFA)和免疫金层析法(immunochromatography，GICA)，三种为主。1989年，spielberg等最先发展了以纳米金为标记物的渗滤试验，用于检测艾滋病病毒抗体，确立斑点免疫金渗滤法(Dot-immunogold filtration assay，DIGFA)。Beggs等最先将金胶用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定(Beggs M，Novotny M，Sampedro S，etal.A self-performing chromatog-raphy immunoassay for the quanlitativedetermination of HCG in urine and serum.Clin.Chem.，1990，36(6)：1084-1085.)