[发明专利]一种含有抗猪CCK/Urease的双效价卵黄抗体的卵黄粉及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，尤其涉及一种含有抗猪胆囊收缩素 (Cholecystokinin，CCK)/肠道细菌脲酶(Urease)的双效价卵黄抗体 (Immunoglublin yolk，IgY)的卵黄粉及其制备方法。

背景技术

如何提高畜禽采食量、改善养殖环境，降低氨对环境的冲击一直是 急待解决的问题。目前提高畜禽采食量的途径常见有以下几种：(1)选用 优质和易于消化的原料；(2)确定日粮合适的营养水平；(3)哺乳期补料； (4)饲喂液体饲料与发酵饲料；(5)使用诱食调节剂；(6)改善畜禽养殖环境 等。利用现代生物工程技术和产品提高动物采食量是目前研究的热点， 而利用抗CCK卵黄抗体从动物生理调节的角度调节动物的采食量是其 中的方法之一。

另一方面，随着养殖业规模化、集约化程度的提高，畜禽自身代谢 过程以及废弃物所产生的氨也大量增加，对养殖场及周边环境带来极大 的负面冲击。畜禽养殖场的氨主要是由于畜禽胃肠道蛋白质代谢过程产 生的尿素和尿酸在微生物脲酶(Urease)作用下的水解产物，并导致蛋 白质的浪费，降低了饲料效率；氨气的积累不仅会危害畜禽的健康，降 低其生产性能，还会污染周边环境。因此，畜禽生产过程中必须采取相 应措施控制氨气的产生和排放。

目前可采用脲酶抑制剂来抑制脲酶活性，从而减少氨的产生。此类 抑制剂包括重金属盐类、天然类固醇萨酒皂角苷(Yucca Sapanion)、二 胺、三胺类化合物、氧肟酸类化合物等。这些抑制剂或者价格昂贵，或 者对畜禽本身的生长有负面作用，或者没有被批准用于畜禽养殖等，因 此开发一种安全、新型脲酶抑制剂很有必要。

发明内容

本发明提供一种含有抗猪CCK/Urease的双效价卵黄抗体IgY的卵 黄粉的制备方法，该卵黄粉能提高猪只的采食量、降低其料肉比以及减 少氨的排放。

本发明的第二个目的在于提供一种含有抗猪CCK/Urease的双效价 卵黄抗体IgY的卵黄粉。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种含有抗猪CCK/Urease的双效价IgY的卵黄粉的制备方法，包括 以下步骤：

1)将纯化浓缩的猪胆囊收缩素39肽(CCK39)/肠道细菌脲酶B 亚基(UreB)融合蛋白与弗氏佐剂混合均匀制成疫苗，用该疫苗免疫健 康开产母鸡，用酶联免疫检测试验测定卵黄中IgY效价并收集高免鸡蛋；

2)从高免鸡蛋中分离蛋黄，制成卵黄粉。

纯化浓缩的CCK39/UreB融合蛋白与弗氏佐剂等体积混合。

所述免疫步骤具体为：

步骤1)首先在健康开产蛋鸡胸肌两侧分别注射100μL浓度为 1mg/mL的含弗氏完全佐剂疫苗；10天后胸肌两侧再分别注射200μL浓 度为1mg/mL的含弗氏不完全佐剂疫苗；25天后再分别注射300μL浓度 为1mg/mL的含弗氏不完全佐剂疫苗；55天后注射400μL浓度为1mg/mL 的不含佐剂疫苗；85天后再注射500μL浓度为1mg/mL的不含佐剂疫苗， 共免疫5次。之后用酶联免疫检测试验进行效价测定，当双效价卵黄抗 体效价达1：1600以上时收集高免鸡蛋以制备高免卵黄粉。

步骤2)所述卵黄粉制备步骤具体为：分离卵清与卵黄，收集卵黄， 均质后喷雾干燥，或真空冷冻干燥，或均质后与吸附剂等质量混合，于 40-50℃干燥等即成卵黄粉。

所述吸附剂为玉米淀粉、轻质碳酸钙或二氧化硅。

一种由上述制备方法制备的含有抗猪CCK/Urease融合蛋白的双效 价卵黄抗体的卵黄粉。

由上述方法制备的含有抗CCK39/UreB融合蛋白的双效价卵黄抗体 就可以分别中和猪只CCK和肠道细菌脲酶。此双效价卵黄抗体作为饲 料添加剂添加到猪饲料中的应用。

由本发明所述方法制备的含有抗CCK/Urease的双效价IgY的卵黄 粉添加到饲料中饲喂猪只，一方面利用抗CCK39作用中和胃肠道内的 CCK，使猪只不产生或延迟产生饱感，从而提高其采食量；另一方面， 该双效价IgY还能与猪肠道中大肠菌群产生的脲酶特异性结合，从而抑 制肠道微生物的脲酶活性，阻止尿素和尿酸转化成氨气，减少氨气的产 生，既能降低养殖场所氨气的浓度，改善养殖环境，又能减少了蛋白质 的流失、浪费，提高饲料效率。

附图说明