[发明专利]天然结核分枝杆菌蛋白

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，具体地说，是涉及一种结核分枝杆菌天然蛋白及其制备方法，以及用此蛋白制备的结核分枝杆菌抗体检测试剂盒。

背景技术

结核病(tuberculosis)俗称″痨病″，是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，M.tuberculosis，简称TB或者MTB)引起的传染性疾病，是全世界由单一致病菌引致死亡最多的疾病。随着二十世纪医药进步和卫生条件的改善，这种曾经蔓延全球，造成数亿人死亡的″白色瘟疫″已经得到了有力的控制。但是近年来，由于流动人口的增加、艾滋病的流行以及耐药性菌株的产生，使结核病的流行成为了严重的公共卫生问题。据世界卫生组织(WHO)报道，2005年全球已有近1/3约20亿人口感染了结核分枝杆菌，现有结核病患者2000万人，每年约有200万人死于该病，2004年新增结核病例约为900万人。而我国是结核病疫情最严重的国家之一，结核病患者数量居世界第二位。现有感染者4亿人，患者500万人，其中200万人为传染性肺结核病患者，每年因患结核病死亡的人数达到15万人。不过，如果按照早期、联合、适量、规律、全程的原则进行治疗，85％的初治结核病人是可以治愈的。因此，要控制结核病的发生与流行就必须加强对结核病的诊断学研究，研究快速、准确、敏感、特异以及简便的诊断方法是有效地控制结核病蔓延的关键。目前，结核病的实验室诊断方法主要有以下几个方面：

细菌学方法，主要包括痰涂片和痰结核菌培养实验。痰涂片抗酸染色法简便快捷，但是检出率低，并且无法区分结核分枝杆菌和其他分枝杆菌；临床检验的″金标准″是细菌培养，但是由于结核菌生长一代需要10—20小时，所以检测时间通常需要1—2月，这极有可能使患者得不到及时的诊断和治疗。

分子生物学方法，随着分子生物学技术的发展，基因诊断技术因具有较高的敏感性、特异性而日益显示其优越性。目前用于结核分枝杆菌诊断的方法主要有PCR、分子杂交和基因芯片等。免疫学方法，最常用的是基于体内迟发型超敏反应的皮肤实验(TST)。即以机体注射的PPD(结核菌纯化蛋白衍生物)是否产生变态反应来判断机体曾否感染过结核分枝杆菌而作为一项辅助诊断，但是结果无法区分活动性结核或是过去感染过以及接种过卡介苗(BCG)等其它情况；另外一个常用的方法就是检测血清的ELISA法。近年来有应用基因工程技术克隆、表达TB基因，简便地获得了大量TB单一的蛋白抗原。自1998年标准菌株H37Rv基因组序列公布以来，大部分编码蛋白质的功能基因得以阐明，特别是运用双向电泳和质谱技术在蛋白组水平上分离和鉴定出了一些可区别人型和牛型以及BCG、极具辅助诊断潜力的特异性蛋白质抗原，为结核病特异性诊断奠定了基础。